Разработка ВЭЖХ-методики идентификации и количественного определения субстанции генистеина

ВВЕДЕНИЕ. Генистеин (5,7-дигидрокси-3-(4-гидроксифенил)хромен-4-он) — полифенольное соединение, обладающее выраженной антиоксидантной активностью и низкой токсичностью. Генистеин может быть применен для профилактики и лечения радиационных поражений при химиолучевой терапии. Однако включение в терапевтические схемы в качестве противорадиационного средства возможно только после его регистрации в качестве лекарственного средства. Для этого необходимо в том числе разработать методики оценки содержания генистеина, соответствующие фармакопейным требованиям к аналитическим методикам.

ЦЕЛЬ. Разработка методики идентификации и количественного определения потенциально активной фармацевтической субстанции генистеина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Образцы фармацевтической субстанции генистеина, синтезированные в ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России, проанализированы с помощью системы высокоэффективной жидкостной хроматографии с диодно- матричным детектированием (ВЭЖХ-ДМД) Prominence LC-20 Shimadzu. Температура в отсеке для колонки — 40 °C, объем инжекции — 100 мкл, длина волны детекции — 261 нм, колонка Shimadzu C18 (4,6 мм×250 см, размер частиц 5 мкм).

РЕЗУЛЬТАТЫ. Разработана методика качественного и количественного определения генистеина методом ВЭЖХ-ДМД, подвижная фаза ацетонитрил : вода очищенная (75:25 об.:об., скорость потока — 0,7 мл/мин). Проведена оценка пригодности разработанной системы. Методика валидирована по показателям: специфичность, линейность (0,001–0,01%; r=0,997), правильность (RSD=1,26%), воспроизводимость (RSD=0,43%), внутридневная прецизионность (RSD<2%) и робастность.

ВЫВОДЫ. Разработанная методика качественного и количественного определения генистеина методом ВЭЖХ-ДМД соответствует фармакопейным требованиям к аналитическим методикам и может быть предложена для включения в проект фармакопейной статьи «Генистеин».

1. Шаймуратов РИ. Радиационно-индуцированные поражения легких. Современное состояние проблемы. Вестник современной клинической медицины. 2020;13(3):63–73. EDN: BIZZHU

2. Wang S, Xu D, Xiao L, et al. Radiation-induced lung injury: from mechanism to prognosis and drug therapy. Radiat Oncol. 2025;20(1):39. https://doi.org/10.1186/s13014-02502617-8

3. Гладилина ИА, Шабанов МА, Кравец ОА и др. Постлучевые повреждения легких. Онкологический журнал: Лучевая диагностика, лучевая терапия. 2020;3(2):9–18. https://doi.org/10.37174/2587-7593-2020-3-2-9-18

4. Citrin DE. Radiation modifiers. Hematol Oncol Clin North Am. 2019;33(6):1041–55. https://doi.org/10.1016/j.hoc.2019.08.004

5. Рождественский ЛМ. Проблемы разработки отечественных противолучевых средств в кризисный период: поиск актуальных направлений развития. Радиационная биология. Радиоэкология. 2020;60(3):279–90. https://doi.org/10.31857/S086980312003011X

6. Shivappa P, Bernhardt GV. Natural radioprotectors on current and future perspectives: A mini-review. J Pharm Bioallied Sci. 2022;14(2):57–71. https://doi.org/10.4103/jpbs.jpbs_502_21

7. Stasiłowicz-Krzemień A, Gościniak A, Formanowicz D, et al. Natural guardians: Natural compounds as radioprotectors in cancer therapy. Int J Mol Sci. 2024;25(13):6937. https://doi.org/10.3390/ijms25136937

8. Lin Y, Chen X, Yu C, et al. Radiotherapy-mediated redox homeostasis-controllable nanomedicine for enhanced ferroptosis sensitivity in tumor therapy. Acta Biomater. 2023;159:300–11. https://doi.org/10.1016/j.actbio.2023.01.022

9. Raj S, Manchanda R, Bhandari M, et al. Review on natural bioactive products as radioprotective therapeutics: Present and past perspective. Curr Pharm Biotechnol. 2022;23(14):1721–38. https://doi.org/10.2174/1389201023666220110104645

10. Montazersaheb S, Jafari S, Aytemir MD, et al. The syner-gistic effects of betanin and radiotherapy in a prostate cancer cell line. Mol Biol Rep. 2023;50(11):9307–14. https://doi.org/10.1007/s11033-023-08828-0

11. Гребенюк АН, Башарин ВА, Тарумов РА и др. Оценка антиоксидантных свойств отечественного синтетического генистеина на моделях in vitro и in vivo. Вестник Российской военно-медицинской академии. 2013;(2):83–7. EDN: RAETOP

12. Serebrenik AA, Fatanmi OO, Wise SY, et al. BIO 300 attenuates whole blood transcriptome changes in mice exposed to total-body radiation. Int J Mol Sci. 2024;25(16):8818. https://doi.org/10.3390/ijms25168818

13. Jomova K, Alomar SY, Valko R, et al. Flavonoids and their role in oxidative stress, inflammation, and human diseases. Chem Biol Interact. 2025;413:111489. https://doi.org/10.1016/j.cbi.2025.111489

14. Тихонова ВВ, Сотникова ТВ, Ерлин ГВ и др. Синтетический генистеин — потенциальная активная фармацевтическая субстанция для разработки противолучевых средств. Радиационная биология. Радиоэкология. 2024;64(1):21–9. https://doi.org/10.31857/S0869803124010038

15. Тарумов РА, Гребенюк АН, Башарин ВА и др. Биологические свойства фитоэстрогена генистеина. Медицина экстремальных ситуаций. 2014;(2):55–68. EDN: SGFWSZ

16. Huang R, Han J, Wang R, et al. Surfactant-free solid dispersion of BCS class IV drug in an amorphous chitosan oligosaccharide matrix for concomitant dissolution in vitro — Permeability increase. Eur J Pharm Sci. 2019;130:147–55. https://doi.org/10.1016/j.ejps.2019.01.031

17. Дударев ВГ, Раевский ВМ, Стрелова ОЮ и др. Совершенствование химического синтеза изофлавона генистеина. Химия растительного сырья. 2025;(1):139–45. https://doi.org/10.14258/jcprm.20250115148

18. Стрелова ОЮ, Волкова КВ, Теслов ЛС и др. Оценка показателей качества перспективной фармацевтической субстанции на основе синтетического генистеина. Бутлеровские сообщения. 2016;48(12):94–101. EDN: XIQUTD

19. Жигалина АА, Стрелова ОЮ, Гребенюк АН. Разработка методики количественного определения генистеина для аттестации стандартного образца. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022;11(4):202–8. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-4-202-208

20. Стаценко ЕС, Штарберг МА, Бородин ЕА. Содержание изофлавоноидов в сое и пищевых продуктах с ее использованием. Техника и технология пищевых производств. 2022;52(2):222–32. https://doi.org/10.21603/2074-9414-2022-22359

21. Кочетова МВ, Семенистая ЕН, Ларионов ОГ и др. Определение биологически активных фенолов и полифенолов в различных объектах методами хроматографии. Успехи химии. 2007;76(1):88–100. EDN: HVEPON

22. Нгуен ТШ, Алексеева ГМ, Генералова ЮЭ. Определение содержания изофлавонов в сухом экстракте травы клевера лугового методом ВЭЖХ. Вопросы обеспечения качества лекарственных средств. 2020;(1):48–53. https://doi.org/10.34907/JPQAI.2020.60.61.006

23. Волкова КВ, Стрелова ОЮ, Гребенюк АН. Сравнительная характеристика физико-химических свойств синтетического и природного генистеина. В кн.: Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине. М.; 2016. С. 455–8.

24. Шишкина ЛН, Козлов МВ, Константинова ТВ и др. Структурные группы природных фосфолипидов, участвующие в образовании комплексов с флавоноидами. Химическая физика. 2023;42(1):28–34. https://doi.org/10.31857/S0207401X23010107