Документальное сопровождение доклинического исследования in vivo в соответствии с принципами надлежащей лабораторной практики

ВВЕДЕНИЕ

Требования к организации и проведению доклинических исследований (ДКИ) лекарственных средств изложены в соответствующих нормативных документах¹, однако доступной литературы и руководств о порядке документирования всех процедур при выполнении ДКИ на практике не представлено.

Применение неудовлетворительных стандартов при планировании, проведении и составлении отчетов по биомедицинским исследованиям, включая эксперименты на животных, приводит к получению ошибочных данных [1][2]. Несколько инициативных групп специалистов поставили цель повысить достоверность и воспроизводимость результатов исследований [3–10]. Рекомендации в различных руководствах по ДКИ схожи, но отличаются детализацией изложения, строгостью требований и объемом необходимых исследований [11][12], и лишь немногие из них охватывают тщательное планирование и проведение исследований на животных [5][13]. Результатом работы стала разработка рекомендаций, включающих пять основных разделов: первые три относятся к планированию эксперимента, четвертый — к проведению и пятый — к документации и отчетности [14].

Руководства ARRIVE² (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments) [15] или PREPARE³ (Planning Research and Experimental Procedures on Animals: Recommendations for Excellence) содержат рекомендации по изложению методов и результатов экспериментов на животных таким образом, чтобы эти результаты были контролируемы и воспроизводимы. В 2024 г. Европейской комиссией опубликовано руководство Promoting Reusable and Open Methods and Protocols (PRO-MaP) [16], которое ориентировано на четыре группы заинтересованных лиц: исследователи, администрации испытательных центров, редакции научных изданий и спонсоры. Документ описывает желаемые действия со стороны каждой из этих групп участников исследования для того, чтобы результаты и методы работы с животными были доступны для воспроизведения.

Общепризнанным фактом является невозможность предусмотреть абсолютно все, что может повлиять на результаты исследования, и заранее избежать всех рисков. Именно поэтому крайне важно иметь в процессе исследования исчерпывающую документацию.

Цель работы — представление одного из возможных вариантов документированного сопровождения доклинического исследования от составления запроса на его выполнение до формирования итогового отчета с дальнейшим переносом данных в регистрационное досье на лекарственное средство.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе использован информационно-аналитический метод исследования. Все рекомендации по документированию ДКИ даны в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств⁴ (Правила ЕАЭС), регламентирующими деятельность испытательных центров, выполняющих ДКИ с использованием экспериментальных животных. В Правилах ЕАЭС помимо общих рекомендаций сделаны некоторые акценты на сопроводительной документации для отдельных этапов исследования, однако для применения на практике этой информации недостаточно. В предлагаемом нами варианте документирования ДКИ указаны номера конкретных пунктов Правил ЕАЭС, для реализации которых предусмотрен тот или иной документ.

Создание каждого документа в процессе ДКИ должно обеспечивать соблюдение принципов надлежащей лабораторной практики и гарантировать полноту и сохранность научной информации, составляющей суть исследования. При этом каждый испытательный центр в ходе разработки конкретных форм и документов должен учитывать правила внутренней системы менеджмента качества.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Начало исследования

Порядок документирования начала исследования не отражен в нормативных документах, действующих в настоящее время на территории России и ЕАЭС.

Для проведения ДКИ используют финансирование по грантам, заключают государственные контракты, исследования могут быть инициативными, т.е. выполняться испытательным центром или фармацевтической компанией за счет собственных средств, но чаще всего данный вид исследований является контрактным. Таким образом, основанием для начала ДКИ может являться заявка, заполненная спонсором исследования. Данный документ должен быть составлен таким образом, чтобы испытательный центр мог сформировать научно аргументированное коммерческое предложение и обосновать объем выборки тест-систем и количество объектов, необходимых для выполнения исследования.

Затем коммерческое предложение необходимо согласовать с руководителем испытательного центра и с экономической службой для составления сметы расходов, закупки тест-систем, материально-технического оснащения и т.д. Это позволит испытательному центру убедиться в собственной готовности к проведению исследования и избежать разногласий со спонсором в последующей работе. Однако для сотрудников испытательного центра необходимо будет дополнительное обучение по ведению документации и взаимодействию со спонсором исследования, так как предлагаемый подход требует временных затрат на действие, которое изначально может казаться избыточным.

После согласования коммерческого предложения со спонсором оформляют договор, и руководитель испытательного центра издает приказ о назначении руководителя исследования⁵, который несет общую ответственность за проведение ДКИ и может подтвердить его соответствие принципам надлежащей лабораторной практики⁶ в рамках действующей системы менеджмента качества испытательного центра.

Подготовка к проведению экспериментальной части исследования

Проведение биоэтической комиссии (БЭК). Руководитель исследования подает заявку на проведение экспертизы проекта исследования и во время заседания комиссии докладывает о проекте исследования на основании технического задания (является обязательным приложением к договору) или на основании проекта плана исследования.

Как один из возможных вариантов, в ходе заседания БЭК руководитель исследования может устно согласовывать с руководителями подразделений, вовлеченных в проведение исследования, особенности предстоящей работы, используемые тест-системы, наличие достаточного количества материалов, оборудования, компетентных специалистов, возможные даты проведения экспериментальной части исследования и т.д.

Дополнительное обучение сотрудников (например, в случае, если отсутствует необходимая стандартная операционная процедура или требуется участие приглашенного специалиста) также обсуждается на заседании БЭК. Руководитель исследования обязан инициировать данный процесс обучения, так как именно он является лицом, заинтересованным в качестве проводимых в ходе ДКИ манипуляций.

После одобрения проекта исследования номер заключения БЭК используют как уникальный идентификационный код исследования⁷.

Очевидно, что вариант рассмотрения всех вопросов именно на заседании БЭК может быть организован в испытательных центрах по-разному, тем более что основной задачей БЭК является решение вопросов гуманного обращения с животными, тяжести проводимых процедур и соблюдения принципов 3R. Присутствие специалистов разных структурных подразделений и разных компетенций помогает всесторонней оценке предлагаемого проекта исследования и планированию мероприятий по улучшению содержания животных в ходе исследования (особенно при моделировании тяжелых заболеваний).

Формирование рабочей группы. Тренинг по исследованию. Руководитель исследования формирует рабочую группу из сотрудников, задействованных в проведении исследования. В зависимости от количества вовлеченных в ДКИ подразделений или испытательных площадок рабочую группу можно сформировать на любом этапе подготовки исследования — с момента назначения руководителя исследования до начала экспериментальной части исследования. Состав рабочей группы зависит от дизайна исследования.

Для участников рабочей группы руководитель исследования проводит тренинг, на котором следует:

• обсудить критические фазы исследования и особенности его проведения, порядок регистрации данных, условия хранения и передачи биоматериала, специфику исследования;
• убедиться в том, что все сотрудники, вовлеченные в проведение исследования, обучены согласно внутренним нормативным документам, необходимым для реализации исследования.

Для каждого раздела работы определяется свой перечень внутренних нормативных документов, регламентирующих выполнение манипуляций и процедур, необходимых для реализации экспериментальной части исследования.

Бланк формирования рабочей группы должен быть подписан всеми сотрудниками, входящими в состав рабочей группы, и руководителем исследования. Все оформленные бланки формирования рабочей группы должны быть сохранены и переданы в архив в качестве приложения к итоговому отчету⁸.

Помимо того что формирование рабочей группы является фактически требованием регламентирующих стандартов, это чрезвычайно полезное мероприятие. Его невыполнение может повлечь за собой множество несоответствий, когда сотрудники не будут осознавать важность тех или иных манипуляций, не будут осведомлены об особенностях, например, введения исследуемых объектов животным или постоперационных манипуляций, или кто-либо из сотрудников окажется не обучен необходимым процедурам.

Обеспечение исследования товарно-материальными ценностями (ТМЦ). Необходимость приобретения ТМЦ (животных, лекарственных средств из аптечной сети и т.д.) также является зоной ответственности руководителя исследования. Руководитель исследования должен оформить необходимые заявки на получение животных, закупку ТМЦ и т.д. и затем отследить их выполнение смежными структурными подразделениями⁹.

Ответственность за обеспечение необходимыми ТМЦ для выполнения экспериментальной части исследования несет руководитель исследования, но данный вопрос должен быть рассмотрен на начальном этапе до заключения договора. Именно для этого составляется коммерческое предложение на основании заявки от спонсора.

Тестовая пробоподготовка. До начала введения исследуемых объектов экспериментальным животным руководитель исследования должен получить копии сопроводительных документов на исследуемые объекты, полученные от спонсора.

Вариант перечня необходимой сопроводительной документации:

• проект инструкции по медицинскому применению исследуемого объекта (если применимо);
• инструкция по безопасности при обращении с исследуемым объектом;
• сертификат анализа (паспорт качества) на конкретную серию исследуемого объекта;
• декларация о соответствии стандартного объекта (если применимо);
• акт приемки-передачи.

Руководитель исследования должен обеспечить проведение тестовой пробоподготовки¹⁰. Данной процедуре часто не уделяют должного внимания. При этом крайне редко при выполнении ДКИ есть возможность ввести экспериментальным животным лекарственное средство в готовой лекарственной форме. Чаще всего требуется приготовление готовых доз для введения, а следовательно, подбор носителей, условий хранения, оценки стабильности приготовленных растворов и т.д.

По результатам тестовой пробоподготовки следует составить отчет, который будет являться инструкцией по подготовке готовых доз для введения. Это позволит гарантировать введение экспериментальным животным исследуемых объектов в необходимой дозе и допустимом объеме.

План исследования¹¹. После одобрения проекта исследования на заседании БЭК руководитель исследования оформляет план исследования, который должен быть проверен сотрудниками службы качества. Требование документировать данную проверку отсутствует в Правилах ЕАЭС, но указано в ГОСТ 33044-2014¹². При этом проверка плана исследования сотрудниками службы качества очень важна, так как именно по этому плану будет выполняться дальнейшая работа, и любые неточности могут привести к искажению или утрате первичных данных, к оформлению поправок и отклонений. Необходимо помнить о правиле: «если не записано, значит не сделано», поэтому проверку плана исследования на полноту и обоснованность каждого раздела, на соответствие договору и техническому заданию следует документировать.

После получения исследуемых объектов и при наличии необходимых тест-систем (как гарантии того, что для начала исследования есть все необходимое) руководитель исследования визирует план исследования своей датированной подписью, что является датой начала исследования. Оригинал плана исследования, подписанного всеми сторонами, в том числе спонсором исследования, хранится у руководителя исследования, по окончании исследования сдается в архив в качестве приложения к отчету. При необходимости оригинал плана исследования может быть передан в архив на временное хранение. В подразделения, вовлеченные в проведение исследования, передаются копии плана исследования.

План-график исследования¹³ — график работ по проведению экспериментальной части исследования, включающий в себя перечень манипуляций и процедур в каждый день исследования. Не является обязательным документом согласно требованиям регламентирующих стандартов, но значимо облегчает работу, в которую вовлечены различные структурные подразделения, а также позволяет спонсору исследования планировать визиты для контроля выполнения конкретных манипуляций.

Руководитель исследования оформляет проект плана-графика, согласует точные даты проведения экспериментальной части исследования с руководителями вовлеченных подразделений, проверяет включение исследования в график их работы, а также предоставляет проект плана-графика сотрудникам, которые будут осуществлять приготовление доз исследуемых объектов для введения, и сотрудникам службы качества для планирования инспекции отдельного исследования.

Руководители подразделений, вовлеченных в проведение исследования, руководитель исследования и сотрудник службы качества визируют план-график датированной подписью.

Все оригиналы планов-графиков и дополнений к ним (при наличии) хранятся у руководителя исследования, после окончания исследования передаются в архив в качестве приложения к итоговому отчету. При необходимости оригинал плана-графика может быть передан в архив на временное хранение. В подразделения, вовлеченные в проведение исследования, передаются копии.

Распространение копий документов по исследованию¹⁴. После того как все документы, необходимые для начала экспериментальной части исследования (утвержденный план исследования и согласованный план-график), готовы, руководителю исследования следует передать их всем участникам рабочей группы и (или) руководителям структурных подразделений, а также сотрудникам службы качества. Если в испытательном центре есть система электронного документооборота или система типа LIMS (laboratory information management system), можно передать копии посредством данных систем, а можно в бумажном варианте, создав необходимое количество копий. В таком случае потребуется подтверждение, что все копии были получены, и с этой целью может быть оформлен лист передачи копий.

Проведение научно-исследовательской работы

Руководитель исследования обязан обеспечивать соблюдение процедур, указанных в плане исследования, оценивать и документировать влияние любых отклонений от плана исследования на качество и достоверность результатов исследования, а также обеспечивать правильное документальное оформление и регистрацию ответственным персоналом всех полученных первичных данных¹⁵. Для реализации данного требования руководитель исследования в соответствии с критическими фазами каждого конкретного исследования составляет дневник руководителя исследования, отмечая в нем оценку ключевых манипуляций, даты их проведения, а также соответствие плану исследования, плану-графику и внутренней нормативной документации. Дневник руководителя исследования до окончания экспериментальной части исследования хранится у руководителя исследования и затем сдается в архив вместе с итоговым отчетом.

Перечень критических фаз исследования, которые обязан контролировать руководитель исследования [17]:

• формирование групп животных;
• регистрация массы тела животных;
• приготовление готовых доз исследуемых объектов для введения лабораторным животным;
• первое введение исследуемых объектов;
• клинический осмотр животных;
• клиническое наблюдение за животными;
• проведение физиологических тестов;
• взятие образцов биоматериала;
• индукция патологии;
• плановая/внеплановая эвтаназия;
• работа с биоматериалом в смежных подразделениях;
• другие процедуры в зависимости от дизайна исследования.

Первичные данные

Одним из важнейших требований соблюдения принципов надлежащей лабораторной практики является фиксация всех данных, полученных в ходе выполнения экспериментальной части исследования. Для заполнения первичных карт в испытательном центре должна быть разработана отдельная процедура¹⁶.

К данным, используемым в рамках правил надлежащих практик (GxP), предъявляют ряд требований. Такие данные должны сопровождаться информацией об их происхождении, легко читаться, быть точными, являться оригинальными записями и регистрироваться своевременно. Совокупность этих базовых требований обозначают аббревиатурами ALCOA (прослеживаемость, читаемость, своевременность, подлинность и точность; attributable, legible, contemporaneous, original, and accurate) и ALCOA+ (дополнительно: полнота, последовательность, устойчивость и доступность данных, обозначенных в акрониме символом «+»; complete, consistent, enduring, available).

Информация о происхождении данных обеспечивается проставлением инициалов, полной рукописной подписи или личной печати исполнителя и (или) ответственного лица с указанием даты и, при необходимости, времени получения данных.

Для обеспечения читаемости, прослеживаемости и сохранности данных следует пользоваться устойчивыми несмываемыми чернилами, не использовать карандаши, не прибегать к стиранию записей ластиком, не закрывать надписи непрозрачной жидкостью, предназначенной для корректировки машинописных текстов. В этих же целях используют, например, прошитые журналы с пронумерованными страницами. Практикуется выпуск заполняемых форм с нанесенным порядковым номером. Архивирование бумажной документации поручается специально обученному персоналу.

Данные должны быть точными и являться оригинальными записями. Оригинальными считаются все первичные данные, полученные при исходной регистрации информации, и все последующие данные, необходимые для реконструкции действий, относящихся к правилам GхP. Важнейшим требованием к оригинальным данным является необходимость их оценки и скрепления подписью. Оригинальные данные должны быть полными и легко извлекаться из мест хранения. Письменные процедуры по рассмотрению и оценке данных должны разъяснять значение этих действий и ответственность лиц, их выполняющих. Необходимы также процедуры, определяющие действия, выполняемые при выявлении неполной или ошибочной регистрации данных.

Данные должны регистрироваться своевременно. В этих целях может использоваться специальное оборудование, не позволяющее произвольно менять дату и время записей (компьютеризированных часов) для датирования документов.

Полученные данные должны быть занесены в первичные карты. Требования к оформлению бланков первичной документации должны быть описаны во внутренней процедуре испытательного центра. Бланки первичной документации чаще всего разрабатывает руководитель исследования после согласования дат проведения экспериментальной части исследования.

В любом бланке первичной документации должна быть отражена следующая информация:

• наименование документа: первичная карта, лист введения и т.д.;
• код исследования;
• дата эксперимента (если дизайном исследования предусмотрено многократное выполнение манипуляций в разные дни, то в документе должно быть предусмотрено соответствующее место для указания дат);
• информация о тест-системе (вид и пол животных);
• номер экспериментальной группы;
• код, доза, путь введения объекта исследования.

Форма таблиц регистрации зависит от дизайна исследования и определяется руководителем исследования. Все ячейки следует оформлять в едином стиле, на основании стандартов заполнения таблиц, принятых при оформлении исследования. В таблицах необходимо указывать размерность полученных величин. Рядом с полем для регистрации данных должна быть ячейка (строчка) для даты, подписи и фамилии исполнителя.

Дизайн таблицы с первичными данными должен быть выбран таким образом, чтобы исполнитель мог быстро и максимально комфортно заполнить необходимые пункты. Например, если карты содержат несколько показателей, регистрируемых одновременно (в динамике теста), то показатели необходимо размещать на одной стороне листа первичной карты по частоте встречаемости слева направо, начиная с самых частых и заканчивая самыми редко встречающимися показателями («Открытое поле»: 1 — количество квадратов, 2 — пристеночные стойки, … 6 — уринация, 7 — дефекация). Размер ячеек должен соответствовать максимальному объему данных, вносимых исполнителем.

Поправки и отклонения

Возможные поправки к плану или обнаруженные отклонения от плана исследования и (или) от стандартных операционных процедур при выполнении манипуляций должны быть документированы¹⁷.

Поправка к плану исследования. Поправку к плану исследования оформляют в случае возникновения целенаправленного изменения, внесенного после даты начала проведения исследования или в случае выявления отклонения, по результатам расследования которого установлено его влияние на результаты исследования. В содержании поправки должно быть описание того, что было предусмотрено планом исследования, затем описание события, которое привело к изменениям, и описание изменения с обоснованием.

Необходимо оценить влияние изменений на полученные результаты исследования. Поправку необходимо согласовать со спонсором исследования. После оформления поправки руководитель исследования обязан предоставить копию оригинала поправки к плану исследования во все подразделения, вовлеченные в проведение исследования, в том числе сотрудникам службы качества. Оригиналы поправок должны храниться вместе с планом исследования и передаваться в архив.

Отклонение от плана исследования. Руководитель исследования оценивает и документирует влияние любых отклонений от плана исследования на качество и достоверность результатов исследования, при необходимости предпринимает соответствующие корректирующие мероприятия. О возникшем отклонении необходимо оповестить спонсора исследования, а затем согласовать с ним уже оформленный документ.

Процесс управления отклонениями, как правило, состоит из следующих этапов:

• идентификация отклонения;
• регистрация отклонения;
• меры коррекции (незамедлительные действия);
• поиск корневых причин и оценка их влияния (расследование);
• разработка плана корректирующих и предупреждающих действий (corrective and preventive actions, САРА);
• реализация САРА;
• оценка результативности САРА.

Процесс управления отклонениями преимущественно осуществляется сотрудниками службы качества при проведении различных видов инспекций, а также ответственными по качеству в структурных подразделениях. Важно предоставить возможность выявления и документирования отклонений всем сотрудникам испытательного центра, чтобы минимизировать риск пропуска незарегистрированных отклонений. Для этого можно разработать простую форму, которую легко заполнит любой сотрудник, заметивший отклонение. Затем эта форма передается в службу качества и (или) руководителю исследования, что поможет оперативно и квалифицированно разобраться в сложившейся ситуации.

Риск-ориентированный подход в отношении расследования отклонений включает два основных принципа управления рисками для качества¹⁸:

• оценка риска для качества должна основываться на научных знаниях;
• степень усилий, формализации и документирования процесса управления рисками для качества должна соотноситься с уровнем риска.

Завершение исследования

При получении первичной документации руководитель исследования переводит данные в электронный формат, проводит их обработку и после анализа оформляет итоговый отчет¹⁹ в соответствии с процедурами, утвержденными в испытательном центре.

Итоговый отчет необходимо составлять в форме детализированного документа, в котором указаны цель и задачи исследования, описаны использованные методы и материалы, обобщены полученные данные и результаты их анализа, представлены выводы. Итоговый отчет должен быть подписан и датирован руководителем исследования со свидетельством о принятии ответственности за достоверность данных.

Руководитель исследования обязан указать в итоговом отчете области исследования, не соответствующие правилам надлежащей лабораторной практики, если таковые имелись.

При проведении исследований с использованием любых видов животных рекомендуется следовать правилам руководства ARRIVE [15], которое универсально и применимо к различным областям исследований, особенно для описания сравнительных исследований в лаборатории. Эти рекомендации также пригодны для поисковых исследований, исследований, проводимых в полевых условиях, и при использовании тканей животных.

Ответственность за научную достоверность результатов лежит на руководителе исследования, а не на спонсоре, обязанностью которого является принятие решения о представлении или непредставлении исследуемого объекта на регистрацию в уполномоченный орган (экспертную организацию).

Обязательные и возможные приложения к итоговому отчету и правила их оформления должны быть описаны в отдельной стандартной операционной процедуре. После оформления итогового отчета руководитель исследования комплектует документы по исследованию и передает их в архив²⁰.

Обязанности сотрудников службы качества в ходе выполнения исследования

В ходе выполнения исследования сотрудники службы качества обязаны проводить инспекцию отдельного исследования²¹. Этапы инспекции могут включать:

• проверку плана исследования²²;
• проверку плана-графика исследования;
• проверку документации (первичных карт)²³;
• проверку экспериментальной части исследования²⁴;
• проверку итогового отчета²⁵;
• проверку комплектности итогового отчета перед сдачей в архив (наличия всех необходимых приложений к отчету, правильности их оформления, нумерации страниц и т.д.).

Все этапы инспекции отдельного исследования со стороны службы качества должны быть документированы. Варианты документирования могут быть различны: например, отдельный чек-лист на каждый этап проверки или один чек-лист на всю проверку. По окончании проверки отдельного исследования сотрудник службы качества оформляет заключение, оригинал которого передается руководителю исследования для включения в итоговый отчет в качестве приложения. В заключении службы качества должны быть отражены все этапы инспекции отдельного исследования и сделан общий вывод о соответствии или несоответствии (возможно, отдельных этапов) правилам надлежащей лабораторной практики.

Важно учесть, что сотрудники службы качества обязаны письменно информировать руководство испытательной лаборатории, руководителя исследования, ведущего исследователя и, при необходимости, других руководителей о результатах инспекции²⁶. Чтобы соблюсти данное требование, можно предусмотреть графы для всех необходимых подписей в чек-листах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представлен вариант документирования всех процедур при выполнении доклинического исследования, который может быть использован испытательными центрами в их практической работе. На основании анализа правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза показано соответствие предложенного варианта документооборота регуляторным требованиям к деятельности руководителя исследования и к порядку проведения инспекций отдельного исследования службой качества испытательного центра. Учитывая необходимую гибкость эффективной системы менеджмента качества, любой этап процедуры и (или) документ может быть видоизменен в зависимости от целей конкретного исследования с учетом соблюдения принципов надлежащей лабораторной практики.

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: С.В. Ходько — сбор, систематизация и обобщение данных, изложенных в нормативных и методических документах и литературе, написание текста рукописи; М.Н. Макарова — критический пересмотр и утверждение окончательного варианта рукописи для публикации; В.Г. Макаров — концепция исследования.

Authors’ contributions. All authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. Svetlana V. Khodko collected, systematised, and summarised data from regulatory documents, guidelines, and literature and drafted the manuscript. Marina N. Makarova critically revised manuscript and approved the final version for publication. Valery G. Makarov conceptualised the study.