Preview

Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств

Расширенный поиск

Количественный анализ митоксантрона методом ВЭЖХ-МС/МС в среде для культивирования клеток Caco-2

https://doi.org/10.30895/1991-2919-2023-449

Аннотация

Митоксантрон — маркерный субстрат белка устойчивости рака молочной железы (BCRP), участвующего в ряде фармакокинетических межлекарственных взаимодействий. При проведении исследований in vitro в связи с возможной насыщаемостью транспортера BCRP целесообразно применять невысокие концентрации митоксантрона, поэтому  необходим  высокочувствительный  метод его количественного определения.

Цель работы: разработка и валидация методики количественного определения митоксантрона в среде для культивирования клеток Caco-2 методом ВЭЖХ-МС/МС.

Материалы и методы: анализ выполняли на высокоэффективном жидкостном хроматографе «Ultimate 3000» (Thermo Fisher Scientific) с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором TSQ Fortis и колонкой UCT Selectra C18 4,6×100 мм, 5 мкм, 100 Å. Использовали градиентный режим элюирования, подвижная фаза — смесь раствора муравьиной кислоты 1% и метанола. Скорость подвижной фазы — 0,3 мл/мин, температура разделения — 35 °С, объем пробы — 5 мкл. Длительность анализа — 10 мин, время удерживания митоксантрона — 5,51 мин. Пробоподготовка заключалась в осаждении белка среды для культивирования метанолом и центрифугировании (13000 g, 10 мин). Детектирование проводили в режиме регистрации положительных ионов, метод ионизации — электрораспыление (3700 В), оболочечный газ 50 л/мин, вспомогательный газ 10 л/мин, продувочный газ 1 л/мин, температура трубки для переноса ионов 300 °С, температура испарителя 350 °С. Переходы масс: 455 m/z → 88,2 m/z при энергии столкновения 25 В, 455 m/z → 358,1 m/z при 18 В, фрагментация источника 0, CID gas 2 мТорр.

Результаты: методика характеризовалась селективностью, чувствительностью (предел обнаружения — 10 нмоль/л, нижний предел количественного определения — 50 нмоль/л), правильностью, прецизионностью и линейностью (50−1000 нмоль/л). Отсутствовал перенос пробы и матричный эффект, образцы проб обладали стабильностью при моделировании реальных условий хранения. Методика позволяет проводить доклинические исследования  влияния  лекарственных веществ на активность BCRP путем оценки трансцеллюлярного переноса митоксантрона в присутствии тестируемого вещества.

Выводы: разработана и валидирована ВЭЖХ-МС/МС методика количественного анализа митоксантрона в среде для культивирования клеток Caco-2.

Об авторах

Ю. С. Транова
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Транова Юлия Сергеевна.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



А. В. Щулькин
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Щулькин Алексей Владимирович - доктор медицинских наук, доцент.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



И. В. Черных
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Черных Иван Владимирович - кандидат биологических наук, доцент.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



П. Ю. Мыльников
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Мыльников Павел Юрьевич.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



А. А. Слепнев
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Слепнев Александр Александрович - кандидат биологических наук, доцент.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



Е. Н. Якушева
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Якушева Елена Николаевна - доктор медицинских наук, профессор.

ул. Высоковольтная, д. 9, Рязань, 390026



Список литературы

1. Martinelli Boneschi F, Vacchi L, Rovaris M, Capra R, Comi G. Mitoxantrone for multiple sclerosis. Cochrane Database Syst Rev. 2013;31(5):CD002127. https://doi.org/10.1002/14651858.CD002127.pub3

2. Doyle LA, Yang W, Abruzzo LV, Krogmann T, Gao Y, Rishi AK, Ross DD. A multidrug resistance transporter from human MCF-7 breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci USA. 1998;95(26):15665–70. https://doi.org/10.1073/pnas.95.26.15665

3. Maliepaard M, Scheffer GL, Faneyte IF, van Gastelen MA, Pijnenborg AC, Schinkel AH, et al. Subcellular localization and distribution of the breast cancer resistance protein transporter in normal human tissues. Cancer Res. 2001;61(8):3458–64. PMID: 11309308

4. Mao Q, Unadkat JD. Role of the breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2) in drug transport — an update. AAPS J. 2015;17(1):65–82. https://doi.org/10.1208/s12248-014-9668-6

5. Kawahara I, Nishikawa S, Yamamoto A, Kono Y, Fujita T. The impact of breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2) on drug transport across Caco-2 cell monolayers. Drug Metab Dispos. 2020;48(6):491–8. https://doi.org/10.1124/dmd.119.088674

6. Ерохина, ПД, Абаленихина ЮВ, Щулькин АВ, Черных ИВ, Попова НМ, Слепнев АА, Якушева ЕН. Изучение влияния прогестерона на активность гликопротеина-Р in vitro. Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2020;28(2):135–42. https://doi.org/10.23888/PAVLOVJ2020282135-142

7. Ерохина, ПД, Абаленихина ЮВ, Щулькин АВ, Черных ИВ, Котлярова АА, Правкин СК и др. Влияние эстрадиола на активность гликопротеина-Р in vitro. Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2020;8(3):329–36. https://doi.org/10.23888/HMJ202083329-336

8. Zhang P, Ling G, Sun J, Sun Y, Pu X, Wang Z, He Z. Determination of mitoxantrone in rat plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method: Application to a pharmacokinetic study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2010;878(24):2260–5. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2010.06.016

9. Мыльников ПЮ, Транова ЮС, Щулькин АВ, Якушева ЕН. Разработка и валидация методики количественного определения метотрексата в транспортной среде методом ВЭЖХ-МC/МС. Фармакокинетика и фармакодинамика. 2021;(1):45–51. https://doi.org/10.37489/2587-7836-2021-1-45-51

10. Hsieh Y. HPLC-MS/MS in drug metabolism and pharmacokinetic screening. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 2008;4(1):93–101. https://doi.org/10.1517/17425255.4.1.93

11. Tietze R, Schreiber E, Lyer S, Alexiou C. Mitoxantrone loaded superparamagnetic nanoparticles for drug targeting: a versatile and sensitive method for quantification of drug enrichment in rabbit tissues using HPLC-UV. J Biomed Biotechnol. 2010;2010:597304. https://doi.org/10.1155/2010/597304

12. Gameiro M, Silva R, Rocha-Pereira C, Carmo H, Carvalho F, Bastos ML, Remião F. Cellular models and in vitro assays for the screening of modulators of P-gp, MRP1 and BCRP. Molecules. 2017;22(4):600. https://doi.org/10.3390/molecules22040600


Дополнительные файлы

Рецензия

Для цитирования:


Транова Ю.С., Щулькин А.В., Черных И.В., Мыльников П.Ю., Слепнев А.А., Якушева Е.Н. Количественный анализ митоксантрона методом ВЭЖХ-МС/МС в среде для культивирования клеток Caco-2. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2023;13(1):104-111. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2023-449

For citation:


Tranova Yu.S., Shchulkin A.V., Chernykh I.V., Mylnikov P.Yu., Slepnev A.A., Yakusheva E.N. Mitoxantrone Quantification by HPLC-MS/MS in Caco-2 Culture Media. Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. Regulatory Research and Medicine Evaluation. 2023;13(1):104-111. (In Russ.) https://doi.org/10.30895/1991-2919-2023-449

Просмотров: 385


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1991-2919 (Print)
ISSN 2619-1172 (Online)