Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве гречихи красностебельной (Fagopyrum rubricaulis) методом спектрофотометрии

ВВЕДЕНИЕ. Гречиха красностебельная (Fagopyrum rubricaulis, сем. Polygonаceae) отличается высоким содержанием флавоноидов, в первую очередь рутина, а в надземной части — кверцетина, изокверцетина, ориентина, витексина, изоориентина, изовитексина и других соединений. Известные фармакологические эффекты гречихи красностебельной — антиоксидантное, кардиопротекторное, гипогликемическое, антибактериальное действие — зависят от комплекса содержания флавоноидов в растительном сырье, поэтому траву гречихи целесообразно стандартизировать по сумме флавоноидов. Однако в отечественной литературе недостаточно информации по стандартизации сырья гречихи красностебельной, в связи с чем разработка методики количественного определения флавоноидов является актуальной.

ЦЕЛЬ. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в траве гречихи красностебельной с использованием спектрофотометрии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Объектом исследования являлась трава гречихи красностебельной. В процессе извлечения были использованы различные экстрагенты (вода очищенная и спирт этиловый 40, 70 и 95%). Подтверждение наличия флавоноидов в сырье проводили методом тонкослойной хроматографии. Для количественного определения флавоноидов в траве гречихи красностебельной был использован спектрофотометрический метод, основанный на измерении оптической плотности раствора в присутствии алюминия хлорида. Валидацию методики проводили согласно Государственной фармакопее Российской Федерации XV издания.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Согласно результатам идентификации методом тонкослойной хроматографии водно-спиртовые извлечения травы гречихи содержали флавоноиды. Способ количественного определения суммы флавоноидов в сырье гречихи красностебельной методом дифференциальной спектрофотометрии предполагает предварительное получение водно-спиртового извлечения путем однократной экстракции точной навески 1 г травы гречихи, измельченной до размера частиц не более 2 мм, спиртом этиловым 40% в соотношении сырье : экстрагент 1:25 при продолжительности экстракции 30 мин. Максимумы поглощения комплексов экстрактов с растворами алюминия хлорида наблюдались при длине волны 410 нм, что соответствовало максимуму поглощения раствора стандартного образца рутина. Количественное определение суммы флавоноидов проводили в пересчете на рутин. Получены результаты валидации методики по критериям: специфичность, линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость. С помощью разработанной методики были проанализированы четыре образца травы гречихи красностебельной производства ООО «Парафарм». Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин варьировало от 9,15±0,20 до 9,55±0,11%.

ВЫВОДЫ. Разработана и валидирована спектрофотометрическая методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве гречихи красностебельной. Данная методика может быть использована для стандартизации лекарственного сырья гречихи красностебельной.

1. Митишев АВ, Феднина АС, Курдюков ЕЕ, Уланова МИ. Некоторые представители рода Fagopyrum: химический состав, фармакологические эффекты, перспективы использования. Химия растительного сырья. 2024;(1):31–56. https://doi.org/10.14258/jcprm.20240112933

2. Феднина АС, Макарцева МГ, Курдюков ЕЕ, Моисеева ИЯ, Елистратов ДГ, Митишев АВ. Современное состояние исследований химического состава некоторых представителей рода Fagopyrum. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2023;26(9):3–11. https://doi.org/10.29296/25877313-2023-09-04

3. Магафурова ФФ, Хуснутдинов ВВ. Предварительные результаты селекции на повышение урожайности у гибридных комбинаций гречихи с высоким содержанием рутина. Вестник КрасГАУ. 2022;(9):27–32. https://doi.org/10.36718/1819-4036-2022-9-27-32

4. Borovaya SA, Klykov AG. Some aspects of flavonoid biosynthesis and accumulation in buckwheat plants. Plant Biotechnol Rep. 2020;14:213–25. https://doi.org/10.1007/s11816-020-00614-9

5. Li J, Yang P, Yang Q. Analysis of flavonoid metabolites in buckwheat leaves using UPLC-ESI-MS/MS. Molecules. 2019;24(7):1310. https://doi.org/10.3390/molecules24071310

6. Jing R, Li H-Q, Hu C-L, Jiang Y-P, Qin L-P, Zheng C-J. Phytochemical and pharmacological profiles of three Fagopyrum buckwheats. Int J Mol Sci. 2016;17(4):589. https://doi.org/10.3390/ijms17040589

7. Yilmaz HO, Nurcan YN, Meriç ÇS. Buckwheat: A useful food and its effects on human health. Curr Nutr Food Sci. 2020;16(1):29–34. https://doi.org/10.2174/1573401314666180910140021

8. Sonam T, Talat A, Sanjay S. An incisive review on buckwheat—A potential underutilized millet. J Drug Res Ayurvedic Sci. 2023;8(Suppl 1):64–75. https://doi.org/10.4103/jdras.jdras_214_23

9. Bao T, Wang Y, Sun C. Optimization of flavonoids extraction from Tartary buckwheat rice and analysis of its hypoglycemic activity. Trans Chin Soc Agricultur Eng. 2016;32(2):383–9. https://doi.org/10.11975/j.issn.1002-6819.2016.z2.054

10. He WP, Li JC, Wang GM. Effect of total flavonoids of buckwheat flower and leaf on myocardial cell apoptosis and Wnt/β-catenin/PPARγ pathway in arrhythmic rats. China J Chinese Materia Medica. 2023;48:220–5. https://doi.org/10.19540/j.cnki.cjcmm.20221014.701

11. Zhong L, Lin Y, Wang C, Niu B, Xu Y, Zhao G, Zhao J. Chemical profile, antimicrobial and antioxidant activity assessment of the crude extract and its main flavonoids from Tartary buckwheat sprouts. Molecules. 2022;27(2):374. https://doi.org/10.3390/molecules27020374

12. Лабковская МВ, Куркин ВА, Шмыгарева АА, Саньков АН. Разработка методики количественного определения травы астрагала перепончатого Astragalus membranaceus L. Вестник Смоленской государственной медицинской академии. 2022;21(4):225–9. https://doi.org/10.37903/vsgma.2022.4.31

13. Калашникова ОА, Рыжов ВМ, Куркин ВА. Методика количественного определения суммы флавоноидов в цветках цефалярии гигантской. Химия растительного сырья. 2024;(2):207–15. https://doi.org/10.14258/jcprm.20240212969

14. Куркин ВА, Куркина АВ, Косенко АА. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в почках Populus alba L. Химия растительного сырья. 2024;(2):168–75. https://doi.org/10.14258/jcprm.20240212904

15. Lund JA, Brown PN, Shipley PR. Quantification of North American and European Crataegus flavonoids by nuclear magnetic resonance spectrometry. Fitoterapia. 2020;143:104537. https://doi.org/10.1016/j.fitote.2020.104537

16. Лубсандоржиева ПБ, Болданова НБ, Попов ДВ. Количественный анализ флавоноидов в растительном средстве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Сибирский медицинский журнал. 2013;116(1):114–5. EDN: RVPDUN

17. Omeje KO, Ezema BO, Onaebi CN. HPLC fingerprint of flavonoids, enzyme inhibition and antioxidant activity of Newbouldia laevis stem-bark: An in vitro and in silico study. Futur J Pharm Sci. 2023;9:36. https://doi.org/10.1186/s43094-023-00486-0

18. Шевлякова ОА, Ихалайнен АА, Антохин АМ, Таранченко ВФ, Гончаров ВМ, Аксенов АВ и др. Современные способы определения и идентификации флавоноидов горянки (Еpimedium). Вестник Московского университета. Серия 2: Химия. 2016;57(3):172–83. EDN: VVVKID

19. March R, Brodbelt J. Analysis of flavonoids: Tandem mass spectrometry, computational methods, and NMR. J Mass Spectrom. 2008;43(12):1581–617. https://doi.org/10.1002/jms.1480

20. Куркин ВА, Савельева АЕ, Куркина АВ, Трифонова ПВ. Флавоноиды надземной части бархатцев отклоненных (Tagetes patula L.). Химия растительного сырья. 2023;(3):143–51. https://doi.org/10.14258/jcprm.20230312189

21. Рязанова ТК, Куркин ВА. Вопросы использования стандартных образцов при анализе лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов. Эталоны. Стандартные образцы. 2023;19(2):47–60. https://doi.org/10.20915/2077-1177-2023-19-2-47-60

22. Куркина АВ. Флавоноиды фармакопейных растений. Самара: Офорт; 2012.