Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи крушиновидной методом спектрофотометрии

Плоды облепихи крушиновидной — фармакопейное сырье для получения облепихового масла. Другие части растения (кора, листья, побеги) являются объектами исследований с целью расширения сырьевой базы и рационального использования ограниченных природных ресурсов. Листья облепихи крушиновидной богаты различными биологически активными соединениями, одними из которых являются флавоноиды.

Цель работы: разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи с использованием спектрофотометрии в видимой области спектра.

Материалы и методы: объектом исследования являлись высушенные листья облепихи крушиновидной трех фенологических фаз (I — фаза завязывания плодов, II — фаза единичного созревания плодов, III — фаза массового созревания пло дов), заготовленные в 2022 г. от дикорастущих растений в Воронежской области. Для количественного определения флавоноидов в листьях облепихи была использована методика, основанная на измерении оптической плотности раствора, содержащего продукты взаимодействия флавоноидов с алюминия хлоридом.

Результаты: максимум поглощения комплекса спиртового извлечения из листьев облепихи крушиновидной с алюминия хлоридом наблюдался при 402±2 нм, что соответствует максимуму поглощения лютеолина. Оптимальные параметры экстрагирования: экстрагент — спирт этиловый 70%; соотношение сырье : экстрагент — 1:150; степень измельчения — 0,5 мм; кратность экстракции — однократная; время экстракции — 45 мин.

Выводы: разработана и валидирована методика количественного спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в листьях облепихи крушиновидной, которая может быть использована для стандартизации данного лекарственного растительного сырья (ЛРС). Установлено, что наибольшее содержание суммы флавоноидов (до 1,5%) характерно для сырья, заготовленного в фенологическую фазу I (середина июня). Содержание флавоноидов постепенно снижается к середине июля и концу августа. В связи с тем что облепиха крушиновидная является источником получения облепихового масла, а ранний сбор листьев может привести к снижению его ценности и несоответствию фармакопейным требованиям, предложено выбрать рекомендуемый срок заготовки листьев, совпадающий со сбором плодов, так как листья на данном этапе роста и развития еще содержат достаточное количество флавоноидов (до 0,8%) и могут быть использованы как самостоятельное ЛРС.

1. Михеев АМ, Деменко ВИ. Облепиха. М.: Росагропромиздат; 1990.

2. Хасенова АБ, Аралбаева АН, Утегалиева РС, Маматаева АТ, Мурзахметова МК. Облепиха крушиновидная (Hippophae rhamnoides L.) — источник биоактивных веществ. Вестник Алматинского технологического университета. 2020;(1):82–8.

3. Абдыкаликова КА, Нечипоренко ЛП. Фитохимический состав надземной части облепихи крушиновидной. Естественные науки. 2008;(4):104–7.

4. Jaroszewska A, Biel W. Chemical composition and antioxidant activity of leaves of mycorrhized sea-buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). Chil J Agric Res. 2017;77(2):155–62. https://doi.org/10.4067/S0718-58392017000200155

5. Suryakumar G, Gupta A. Medicinal and therapeutic potential of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). J Ethnopharmacol. 2011;138(2):268–78. https://doi.org/10.1016/j.jep.2011.09.024

6. Новрузов ЭН, Мамедов ЗГ, Мустафаева ЛА, Мирюсифова ХМ, Зейналова АМ. Состав и содержание флавоноидов листьев Hippophae rhamnoides L., произрастающих в Азербайджане. Химия растительного сырья. 2018;(3):209–14. https://doi.org/10.14258/jcprm.2018033772

7. Dharam PA, Amrit KS, Jyoti K, Tanveer N. Pharmacognostical characterization and preliminary phytochemical investigation of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) leaves. Indo Global Journal of Pharmaceutical Sciences. 2012;2(2):108–13. https://doi.org/10.35652/IGJPS.2012.13

8. Criste A, Urcan AC, Bunea A, Furtuna FRP, Olah NK, Madden RH, et al. Phytochemical composition and biological activity of berries and leaves from four Romanian sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) varieties. Molecules. 2020;25(5):1170. https://doi.org/10.3390/molecules25051170

9. Tkacz K, Wojdyło A, Turkiewicz P, Nowicka P. Triterpenoids, phenolic compounds, macroand microelements in anatomical parts of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries, branches and leaves. J Food Compos Anal. 2021;103:104107. https://doi.org/10.1016/j.jfca.2021.104107

10. Нилова ЛП, Малютенкова СМ. Антиоксидантные комплексы облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) северо-запада России. Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий. 2021;83(1):108–14. https://doi.org/10.20914/2310-1202-2021-1-108-114

11. Kumar MS, Dutta R, Prasad D, Misra K. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves for the comparative evaluation of antioxidant activity. Food Chem. 2011;127(3):1309–16. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2011.01.088

12. Ji M, Gong X, Li X, Wang C, Li M. Advanced re search on the antioxidant activity and mechanism of polyphenols from Hippophae species—a review. Molecules. 2020;25(4):917. https://doi.org/10.3390/molecules25040917

13. Исачкин АВ, Зубик ИН, Потапова АВ, Ермаков МА. Корреляционный анализ фенофаз и феноинтервалов у сортов облепихи крушиновидной (Hippophaе rhamnoides L.) в коллекции ГБС РАН им. Н.В. Цицина. Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. 2019;(2):64–9.

14. Корулькин ДЮ, Абилов ЖА, Музычкина РА, Толстиков ГА. Природные флавоноиды. Новосибирск: Тео; 2007.

15. Лесовая ЖС, Писарев ДИ, Новиков ОО, Романова ТА. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. 2010;22–2(93):145–9.

16. Дроздова ИЛ, Лупилина ТИ. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в траве икотника серого. Человек и его здоровье. 2016;(1):106–12.

17. Тринеева ОВ, Рудая МА, Перова ИБ, Сливкин АИ, Эллер КИ. Изучение профиля флавоноидов пло дов облепихи крушиновидной различных сортов. Биофармацевтический журнал. 2021;13(3):22–9. https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-3-22-29

18. Олешко ОА, Кондратьева НА. Определение подлинности и количественного содержания биологически активных веществ в экстракте неомикон сухом. Современные проблемы науки и образования. 2015;(2–3):238.

19. Рудаков ОБ, Востров ИА, Федоров СВ, Филиппов АА, Селеменев ВФ, Приданцев АА. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж: Водолей; 2003.