vedomostiregmedРегуляторные исследования и экспертиза лекарственных средствRegulatory Research and Medicine Evaluation3034-30623034-3453Federal State Budgetary Institution ‘Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI ‘SCEEMP’)10.30895/1991-2919-2026-16-1-27-36vedomostiregmed-831Research ArticleГЛАВНАЯ ТЕМА: ФАРМАКОТЕРАПИЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ: РАЗРАБОТКА И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВMAIN TOPIC: PHARMACOTHERAPY OF CARDIOVASCULAR DISEASES: DRUG DEVELOPMENT AND QUALITY CONTROLСтандартизация лекарственных препаратов, содержащих сердечные гликозиды ландыша: оценка возможности отказа от биологического методаStandardizing Medicinal Products with Convallaria majalis Cardiac Glycosides: The Prospect of Phasing out Biological Methodhttps://orcid.org/0000-0002-9917-9367ГоломазоваТ. А.GolomazovaT. A.

Голомазова Татьяна Александровна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Tatyana A. Golomazova

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

golomazovata@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7818-5303АнтоноваН. П.AntonovaN. P.

Антонова Наталия Петровна, канд. биол. наук 

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Natalia P. Antonova, Сand. Sci. (Biol.) 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0002-6787-0647СеменоваН. Е.SemenovaN. E.

Семенова Наталья Евгеньевна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Natalia E. Semenova

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0001-8389-4799ШеферЕ. П.SheferE. P.

Шефер Елена Павловна, канд. фарм. наук 

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Elena P. Shefer, Сand. Sci. (Pharm.) 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0002-3278-1994ПрохватиловаС. С.ProkhvatilovaS. S.

Прохватилова Светлана Степановна, канд. фарм. наук  

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Svetlana S. Prokhvatilova, Сand. Sci. (Pharm.) 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0003-0379-6158БагироваВ. Л.BagirovaV. L.

Багирова Валерия Леонидовна, д-р фарм. наук, профессор 

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Valeria L. Bagirova, Dr. Sci. (Pharm.), Professor 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation2026070320261612736Copyright © Голомазова Т.А., Антонова Н.П., Семенова Н.Е., Шефер Е.П., Прохватилова С.С., Багирова В.Л., 20262026Голомазова Т.А., Антонова Н.П., Семенова Н.Е., Шефер Е.П., Прохватилова С.С., Багирова В.Л.Golomazova T.A., Antonova N.P., Semenova N.E., Shefer E.P., Prokhvatilova S.S., Bagirova V.L.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vedomostincesmp.ru/jour/article/view/831ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Согласно утвержденной российской нормативной документации для определения подлинности лекарственных средств, содержащих сердечные гликозиды ландыша (Convallaria majalis), используют общегрупповые качественные реакции и метод тонкослойной хроматографии; для количественной оценки гликозидов применяют метод спектрофотометрии и биологический метод определения. Постепенный отказ от испытаний на животных, а также тот факт, что методики, основанные на биологическом методе, не характеризуются высокой точностью и воспроизводимостью, обусловливают необходимость разработки новых, физико-химических методов контроля качества лекарственных препаратов ландыша.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Замена in vivo методики количественного определения сердечных гликозидов в лекарственных препаратах ландыша на методику, основанную на физико-химическом методе анализа.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Объектами исследования являлись лекарственные средства отечественного производства: «Ландыша настойка» и «Зеленина капли»; стандартный образец экстракта ландыша, стандартный образец конваллятоксина (93,0%). Оценка биологической активности выполнена согласно фармакопейной методике на озерных лягушках (Rana ridibunda). Содержание конваллятоксина определено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по методике, разработанной авторами. Проведена оценка ранговой корреляции с использованием коэффициента Спирмена между данными, полученными биологичеcким методом и методом ВЭЖХ, а также ВЭЖХ и спектрофотометрией.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Показана возможность использования методики ВЭЖХ для качественной и количественной оценки препаратов, содержащих сердечные гликозиды ландыша. Определено среднее содержание доминирующего и наиболее биологически активного гликозида — конваллятоксина методом ВЭЖХ в препаратах ландыша: стандартный образец экстракта ландыша 0,14578 мг/мл; ландыша настойка 0,01397 мг/мл; Зеленина капли 0,00630 мг/мл; также определена биологическая активность объектов исследования. С помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена проведен корреляционный анализ результатов исследования.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Для идентификации и количественного определения в лекарственных средствах «Ландыша настойка» и «Зеленина капли» конваллятоксина предложена методика, основанная на методе ВЭЖХ, позволяющая получать воспроизводимые и точные результаты. Рекомендуемые нормы содержания конваллятоксина: «Ландыша настойка» 0,01–0,02 мг/мл; «Зеленина капли» 0,004–0,008 мг/мл.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. The approved Russian regulations and guidelines on identification of medicinal products containing Convallaria majalis cardiac glycosides use group identification tests and thin-layer chromatography; spectrophotometry and bioassay are applied to quantify glycosides. Phasing out animal tests and lack of precision and reproducibility for bioassay methods necessitate the development of new physicochemical methods for the quality control of Convallaria majalis products.

AIM

AIM. This study aimed to replace in vivo assay of cardiac glycosides in Convallaria majalis medicinal products with physicochemical analysis.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. The study objects included Russian products: Convallaria tincture and Zelenin drops; Convallaria majalis extract reference standard, convallatoxin reference standard (93.0%). Biological activity was assessed on Rana ridibunda according to a compendial method. Convallatoxin content was determined using high-performance liquid chromatography (HPLC) within our method. Spearman’s rank correlation was assessed between the results of bioassay and HPLC/HPLC and spectrophotometry.

RESULTS

RESULTS. The study proved validity of an HPLC method for identification and quantitation of medicinal products containing Convallaria majalis cardiac glycosides. The content of convallatoxin, the predominant and most biologically active glycoside was determined by HPLC: Convallaria majalis extract standard reference — 0.14578 mg/mL; Convallaria majalis tincture — 0.01397 mg/mL; Zelenin drops — 0.00630 mg/mL; biological activity was determined as well. Spearman’s rank correlation of the findings was performed.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. An HPLC-based method providing precise and reproducible results has been proposed for convallatoxin identification and quantitation in Convallaria tincture and Zelenin drops. Recommended convallatoxin content: Convallaria tincture 0.01–0.02 mg/mL; Zelenin drops 0.004–0.008 mg/mL.

сердечные гликозидыстандартизацияВЭЖХландышнастойкаЗеленина каплибиологический методспектрофотометриякорреляционный анализозерные лягушкиRana ridibundaконваллятоксинcardiac glycosidesstandardizationhigh-performance liquid chromatographyHPLCConvallaria majalislily of the valleytinctureZelenin dropsbiological methodspectrophotometrycorrelation analysismarsh frogsRana ridibundaconvallatoxinРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00061-26-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 124022200096-0).The study was conducted by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products as part of the applied research funded under State Assignment No. 056-00061-26-00 (R&D Registry No. 124022200096-0).ReferencesStansbury J, Saunders Р, Winston D, Zampieron ER. The use of Convallaria and Crataegus in the treatment of cardiac dysfunction. J Restor Med. 2012;1(1):107–11. https://doi.org/10.14200/jrm.2012.1.1012Stansbury J, Saunders Р, Winston D, Zampieron ER. The use of Convallaria and Crataegus in the treatment of cardiac dysfunction. J Restor Med. 2012;1(1):107–11. https://doi.org/10.14200/jrm.2012.1.1012Ivanović S, Simić K, Lekić S, et al. Plant metabolomics as a tool for detecting adulterants in edible plant: A case study of Allium ursinum. Metabolites. 2022;12(9):849. https://doi.org/10.3390/metabo12090849Ivanović S, Simić K, Lekić S, et al. Plant metabolomics as a tool for detecting adulterants in edible plant: A case study of Allium ursinum. Metabolites. 2022;12(9):849. https://doi.org/10.3390/metabo12090849Быков ЕВ, Вихарева ЕВ. Фармакопейные методы анализа сердечных гликозидов в растительном сырье и лекарственных препаратах (обзор). Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2023;26(7):5−11. https://doi.org/10.29296/25877313-2023-07-01Bykov EV, Vikhareva EV. Pharmacopoeial methods for the analysis of cardiac glycosides in plant raw materials and medicines (review). Problems of Biological, Medical and Pharmaceutical Chemistry. 2023;26(7):5−11 (In Russ.). https://doi.org/10.29296/25877313-2023-07-01Орынбекова СО, Келеке АС, Сакипова ЗБ и др. Сравнительная оценка методик идентификации сердечных гликозидов в лекарственном растительном сырье. Вестник Казахского Национального медицинского университета. 2019;(2):396–9.Orynbekova SO, Keleke AS, Sakipova ZB, et al. Comparative evaluation of the identification me-thods of cardiac glycosides in herbal drugs. Vestnik KazNMU. 2019;(2):396–9 (In Russ.).Гуревич МА, Гаврилин АА. Сердечные гликозиды в современной клинической практике. Альманах клинической медицины. 2014;(35):101–5. Gurevich MA, Gavrilin AA. https://doi.org/10.18786/2072-0505-2014-35-101-105Gurevich MA, Gavrilin AA. Cardiac glycosides in up to-date clinical practice. Almanaс of Clinical Medicine. 2014;(35):101–5 (In Russ.). https://doi.org/10.18786/2072-0505-2014-35-101-105Дукельская НК, Гармашова ИВ, Давыдова МВ. Сравнительный анализ препаратов сердечных гликозидов, используемых в современной фармакотерапии. Известия Российской военно-медицинской академии. 2020;39(S3–4):82–5. EDN: SNCYHHDukelskaya NK, Garmashova IV, Davydova MV. Comparative analysis of the products of cardiac glycosides used in modern pharmacotherapy. Russian Military Medical Academy Report. 2020;39(S3–4):82–5 (In Russ.). EDN: SNCYHHДоронина ДА. Перспективы изучения биологически активных веществ ландыша майского Convallaria majalis L. В кн.: От биохимии растений к биохимии человека: Международная научная конференция. М.; 2022. С. 281–8. https://doi.org/10.52101/9785870191041_281Doronina DA. Prospects for the study of biologically active substances of lily of the valley Convallaria majalis L. In: From plant biochemistry to human biochemistry: International scientific conference. Moscow; 2022. P. 281–8 (In Russ.). https://doi.org/10.52101/9785870191041_281Witkowska A, Gryn-Rynko A, Syrkiewicz P, et al. Characterizations of white mulberry, sea-buckthorn, garlic, lily of the valley, motherwort, and hawthorn as potential candidates for managing cardiovascular disease. In vitro and ex vivo animal studies. Nutrients. 2024;16(9):1313. https://doi.org/10.3390/nu16091313Witkowska A, Gryn-Rynko A, Syrkiewicz P, et al. Characterizations of white mulberry, sea-buckthorn, garlic, lily of the valley, motherwort, and hawthorn as potential candidates for managing cardiovascular disease. In vitro and ex vivo animal studies. Nutrients. 2024;16(9):1313. https://doi.org/10.3390/nu16091313Голомазова ТА, Антонова НП, Cеменова НЕ и др. Разработка и валидация методики определения конваллятоксина в лекарственных препаратах, содержащих сердечные гликозиды ландыша. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2024;14(5):580–9. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2024-14-5-580-589Golomazova TA, Antonova NP, Semenova NE, et al. Development and validation of an analytical procedure for determining convallatoxin in medicinal products containing cardiac glycosides of lily of the valley. Regulatory Research and Medicine Evaluation. 2024;14(5):580–9 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/1991-2919-2024-14-5-580-589Баврина АП, Борисов ИБ. Современные правила применения корреляционного анализа. Медицинский альманах. 2021;(3):70–9. EDN: TPSSIXBavrina AP, Borisov IB. Modern rules for applying correlation analysis. Medical Almanac. 2021;(3):70–9 (In Russ.). EDN: TPSSIXГайдерова ЛА, Алпатова НА, Головинская ОВ и др. Реализация концепции 3Rs при контроле качества биологических препаратов: современное состояние и перспективы (обзор). Безопасность и риск фармакотерапии. 2025;13(2):229–39. https://doi.org/10.30895/2312-7821-2025-13-2-229-240Gaiderova LA, Alpatova NA, Golovinskaya OV, et al. Implementation of the 3Rs Concept in quality control of biologicals: Status and prospects (review). Safety and Risk of Pharmacotherapy. 2025;13(2):229–39 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2312-7821-2025-13-2-229-240Akkermans A, Chapsal JM, Coccia EM, et al. Animal testing for vaccines. Implementing replacement, reduction and refinement: Challenges and priorities. Biologicals. 2020;68:92–107. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2020.07.010Akkermans A, Chapsal JM, Coccia EM, et al. Animal testing for vaccines. Implementing replacement, reduction and refinement: Challenges and priorities. Biologicals. 2020;68:92–107. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2020.07.010

The authors declare that there are no conflicts of interest present.