Попкова Александра Владимировна
ул. Связи, д. 38, стр. 1, вн. тер. г. поселок Стрельна, Санкт-Петербург, 198515
Aleksandra V. Popkova
38/1 Svyazi St., Intracity Municipality the Settlement of Strelna, Saint Petersburg, 198515
ВВЕДЕНИЕ. Лекарственные средства, получаемые с использованием технологии рекомбинантной ДНК, широко применяются в терапии онкологических, иммуновоспалительных и инфекционных заболеваний. Объем исследований по разработке новых белковых препаратов, в том числе моноклональных антител, а также методик контроля качества таких препаратов увеличивается. Пептидное картирование позволяет подтвердить подлинность, первичную структуру белка, генетическую стабильность и идентифицировать изменения в структуре.
ЦЕЛЬ. Систематизация современных методологических подходов к разработке методик пептидного картирования.
ОБСУЖДЕНИЕ. Одним из главных методов подтверждения подлинности белков является пептидное картирование, основанное на ферментативном гидролизе белка, с получением уникального набора пептидных фрагментов. Несмотря на уникальность каждой конкретной методики, все они базируются на общих принципах пробоподготовки и анализа, а также регуляторных требованиях. Разработка метода — сложный многостадийный процесс. В настоящее время для расщепления белка используются различные ферменты, однако «золотымстандартом» является трипсин. Все большее распространение имеют готовые решения для проведения реакции расщепления белков: высокоспецифичные и воспроизводимые наборы; способы пробоподготовки на основе иммобилизации ферментов на магнитных частицах, а также автоматизированные процедуры. Это позволяет минимизировать ошибки ручной пробоподготовки, повысить воспроизводимость результатов и сократить время анализа.
ВЫВОДЫ. Современная методология пептидного картирования эволюционирует в сторону повышения воспроизводимости и эффективности за счет внедрения стандартизированных и автоматизированных решений для пробоподготовки при сохранении трипсина в качестве основного гидролитического агента. Информация об используемых подходах позволит исследователям ориентироваться в многообразии доступных аналитических решений, ускорить разработку методов и обеспечить надежный контроль качества белковых препаратов.
INTRODUCTION. Medicines, based on recombinant DNA technology, are widely used in the treatment of cancer, immune-inflammatory, and infectious diseases. Research on the development of new protein-derived drugs, including monoclonal antibodies, as well as methods for quality control of such drugs, is ever increasing. Peptide mapping allows it to verify the primary protein structure, genetic stability, and identify structural changes.
AIM. Systematization of current methodological approaches to the development of peptide mapping methods.
DISCUSSION. One of the main methods for confirming protein authenticity is peptide mapping based on enzymatic hydrolysis of protein to produce a unique set of peptide fragments. Despite the uniqueness of each method, they all share common principles of sample preparation and analysis, as well as regulatory requirements. Method development is a complex, multi-step process. Currently, various enzymes are used for protein cleavage, but trypsin remains the “gold standard”. Ready-made solutions for protein cleavage reactions are becoming increasingly common such as highly specific and reproducible kits, sample preparation approaches based on immobilized enzymes on magnetic particles, and automated procedures. These options minimize errors in manual sample preparation, improve the reproducibility of results, and reduce analysis time.
CONCLUSIONS. Current peptide mapping methodology is evolving towards increased reproducibility and efficiency through the introduction of standardized and automated sample preparation solutions while maintaining trypsin as the primary enzyme for protein cleavage. Information on approaches used will enable researchers to navigate the diversity of available analytical solutions, accelerate method development, and ensure reliable quality control of protein-based medicines.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.