Шаповалова Ольга Владимировна - канд. фарм. наук.
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Olga V. Shapovalova - Cand. Sci. (Pharm.).
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
Неугодова Наталия Петровна - канд. биол. наук.
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Natalia P. Neugodova - Cand. Sci. (Biol.).
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
Сапожникова Галина Алексеевна.
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Galina A. Sapozhnikova.
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
ВВЕДЕНИЕ. Кинетические методы определения бактериальных эндотоксинов (БЭ) в лекарственных препаратах для парентерального применения с помощью лизата амебоцитов из гемолимфы мечехвостов позволяют количественно определять содержание эндотоксинов в широком диапазоне концентраций. Для разработки конкретной методики на основе этих методов для контроля качества и стандартизации лекарственных препаратов необходимо уточнить условия ее использования, в частности установить наименьшее разведение, в котором отсутствуют мешающие факторы.
ЦЕЛЬ. Разработка методики количественного определения бактериальных эндотоксинов хромогенным кинетическим методом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Испытывали растворы образцов лекарственных препаратов с действующими веществами различных фармакологических групп: моноклональные антитела — «меполизумаб» и антикоагулянт прямого действия — «надропарин», с нормами предельного содержания БЭ «не более 20 ЕЭ/мл» и «не более 95 ЕЭ/мл» соответственно, с разной кратностью разведения, но не превышающей значения максимально допустимого разведения. Исследование выполняли с использованием фотоколориметра «BioТek EL×800» и программного обеспечения «Endoscan-V».
РЕЗУЛЬТАТЫ. В исследовании препарата с действующим веществом «меполизумаб» установлено, что в диапазоне разведений от 1:10 до 1:40 хромогенным кинетическим методом возможно обнаружить БЭ в количествах 0,0078–0,224 ЕЭ/мл. Начиная с разведения 1:50 метод позволяет осуществить только качественную оценку наличия БЭ. Содержание БЭ в лекарственном препарате с действующим веществом «надропарин» следует определять начиная с разведения 1:1000, в котором влияние мешающих факторов отсутствует.
ВЫВОДЫ. Разработаны методики определения БЭ хромогенным кинетическим методом (метод D) для препаратов меполизумаба и надропарина. Рекомендовано при разработке методик количественного определения БЭ в индивидуальных лекарственных препаратах определять наименьшее разведение образца, в котором отсутствуют мешающие факторы, и вносить эту информацию в документацию методики. Данный подход повышает точность выполнения анализа, обеспечивает экономию материальных ресурсов и времени при проведении рутинных испытаний.
INTRODUCTION. Kinetic bacterial endotoxin (BE) testing methods based on amoebocyte lysate from the haemolymph of the horseshoe crab can quantify BEs in parenteral medicinal products across a broad range of concentrations. To develop a specific analytical procedure that is based on these methods and can be implemented into pharmaceutical quality control and standardisation, it is required to ascertain the conditions for its use, in particular, to determine the lowest product dilution that would neutralise interfering factors.
AIM. This study aimed to develop an analytical procedure for the quantitative determination of BEs by the kinetic chromogenic method.
MATERIALS AND METHODS. The study examined samples of medicinal products containing active substances from different classes, including a monoclonal antibody (mepolizumab) and a direct-acting anticoagulant (nadroparin). The BE limits for mepolizumab and nadroparin were ≤20 EU/mL and ≤95 EU/mL, respectively. The samples were tested at different dilutions, which did not exceed the maximum valid dilution. The measurements were performed using a BioТek EL×800 photocolourimeter and EndoScan-V software.
RESULTS. The results for mepolizumab samples show that the kinetic chromogenic method can quantify BEs in mepolizumab medicinal products in the dilution range of 1:10 to 1:40. The study detected BEs in quantities of 0.0078–0.224 EU/mL within this dilution range. However, at a dilution ratio of 1:50 or higher, the method is suitable only for qualitative BE tests. For nadroparin medicinal products, the quantitative determination of BEs should start at a dilution of 1:1000 (the study demonstrated no influence of interfering factors at this dilution).
CONCLUSIONS. The authors developed analytical procedures for the determination of BEs in mepolizumab and nadroparin medicinal products by the kinetic chromogenic method (method D). When developing analytical procedures for the quantification of BEs in individual medicinal products, the developer should determine the lowest sample dilution that would neutralise interfering factors. Subsequently, the dilution should be specified in the documentation for the analytical procedure. This approach can enhance assay accuracy and save time and resources in routine testing.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.