vedomostiregmedРегуляторные исследования и экспертиза лекарственных средствRegulatory Research and Medicine Evaluation3034-30623034-3453Federal State Budgetary Institution ‘Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI ‘SCEEMP’)10.30895/1991-2919-2025-680vedomostiregmed-680Research ArticleРАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКDEVELOPMENT AND VALIDATION OF RESEARCH METHODSРазработка и валидация ВЭЖХ-методики определения кофейной кислоты в траве нонеи русскойDevelopment and Validation of an Analytical Procedure for the Determination of Caffeic Acid in Nonea rossica Herb by HPLChttps://orcid.org/0000-0002-9224-9350ВеличкоВ. В.VelichkoV. V.

Величко Виктория Владимировна - канд. фарм. наук, доцент.

Красный пр-т, д. 52, Новосибирск, 630091

Viktoriya V. Velichko - Сand. Sci. (Pharm.), Associate Professor.

52 Krasny Ave, Novosibirsk 630091

velichkvik@rambler.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9170-6214ЛастовкаА. В.LastovkaA. V.

Величко Виктория Владимировна - канд. фарм. наук, доцент.

Академика Лаврентьева пр-т, д. 9, Новосибирск, 630090; ул. Пирогова, д. 1, Новосибирск, 63009

Anastasiya V. Lastovka - Cand. Sci. (Chem.).

9 Academician Lavrentyev Ave, Novosibirsk 630090;1 Pirogov St., Novosibirsk 630090

lastovka@nioch.nsc.ruКарташоваМ. Е.KartashovaM. E.

Карташова Марина Елвардовна

Красный пр-т, д. 52, Новосибирск, 630091

Marina E. Kartashova 

52 Krasny Ave, Novosibirsk 630091

kartmarel@rambler.ruГайдукА. А.GaidukA. A.

Гайдук Анастасия Андреевна

Академика Лаврентьева пр-т, д. 9, Новосибирск, 630090; ул. Пирогова, д. 1, Новосибирск, 630090

Anastasiya A. Gaiduk

9 Academician Lavrentyev Ave, Novosibirsk 630090;1 Pirogov St., Novosibirsk 630090

a.zheryadina@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-1904-7901КругловД. С.KruglovD. S.

Круглов Дмитрий Семенович - канд. техн. наук, доцент.

Красный пр-т, д. 52, Новосибирск, 630091

Dmitriy S. Kruglov - Сand. Sci. (Tech.), Associate Professor.

52 Krasny Ave, Novosibirsk 630091

kruglov_ds@mail.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияNovosibirsk State Medical UniversityRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение науки «Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова» Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН); Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет» (НГУ)РоссияN.N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry; Novosibirsk State UniversityRussian Federation202501052025152222228Copyright © Величко В.В., Ластовка А.В., Карташова М.Е., Гайдук А.А., Круглов Д.С., 20252025Величко В.В., Ластовка А.В., Карташова М.Е., Гайдук А.А., Круглов Д.С.Velichko V.V., Lastovka A.V., Kartashova M.E., Gaiduk A.A., Kruglov D.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vedomostincesmp.ru/jour/article/view/680ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Спиртовой экстракт Nonea rossica Steven согласно данным литературы проявляет антикоагулянтную, противомикробную и противогрибковую активность, что может быть связано с наличием в составе растения кофейной кислоты и ее дериватов. Для стандартизации сырья необходима разработка методики количественного определения кофейной кислоты. Наиболее перспективным методом такого определения является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Разработка и валидация методики определения кофейной кислоты в траве нонеи русской с использованием ВЭЖХ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Объектом исследования служила надземная часть нонеи русской, заготовленная в Новосибирской области на остепненном луге в период цветения. Исследование проводили на жидкостном хроматографе Agilent 1100 с колонкой Zorbax SB-C18 (150 мм × 2,1 мм × 3,5 мкм) и детектированием при 330 нм.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Хроматографические условия подобраны таким образом, чтобы обеспечить получение пика кофейной кислоты, соответствующего одной молекулярной форме, а также достичь приемлемого разрешения пиков компонентов экстракта при максимальной интенсивности пика аналита. Разработаны условия градиентного элюирования с использованием двухкомпонентной подвижной фазы: метанола (растворитель Б) и 0,01 М KH2PO4 водного раствора, рН 2,70 (растворитель А) при скорости потока 0,25 мл/мин. В этих условиях кофейная кислота элюировалась через 13,5 мин при общем времени анализа 60 мин. Методика валидирована по критериям: специфичность, аналитическая область, пределы обнаружения и количественного определения, правильность, повторяемость и внутрилабораторная прецизионность.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Разработана и валидирована методика количественного определения кофейной кислоты в траве нонеи русской методом ВЭЖХ. Относительное стандартное отклонение результатов анализа не превышало 5,0%. Методика может применяться при стандартизации лекарственного растительного сырья «Нонеи русской трава» для его последующего использования в медицинской практике.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. According to the literature, alcoholic extracts of Nonea rossica Steven have anticoagulant, antimicrobial, and antifungal properties, which may be due to the presence of caffeic acid and its derivatives in the plant. The standardisation of this herbal drug requires the development of an analytical procedure for the quantitative determination of caffeic acid, and the most promising method for this is high-performance liquid chromatography (HPLC).

AIM

AIM. This study aimed to develop and validate an analytical procedure for the quanti­tative determination of caffeic acid in Nonea rossica herb by HPLC.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. The study focused on the aerial parts of Nonea rossica plants collected in a steppificated meadow in the Novosibirsk Region during the flowering stage. The study used an Agilent 1100 Series HPLC system equipped with a Zorbax SB-C18 column (150 × 2.1 mm, 3.5 μm) and a detector operating at a wavelength of 330 nm.

RESULTS

RESULTS. The authors selected chromatographic conditions to obtain one peak per one molecular form of caffeic acid, an acceptable resolution of the extract components, and the maximum intensity of the analyte peak. The gradient elution conditions developed in this study were as follows: a two-component mobile phase, including a 0.01 M aqueous solution of KH2PO4 with a pH of 2.70 (Solvent A) and methanol (Solvent B), and a flow rate of 0.25 mL/min. Under these conditions, caffeic acid eluted at 13.5 minutes, and the total analysis time was 60 minutes. The analytical procedure was validated for its specificity, analytical range, detection limit, quantitation limit, accuracy, repeatability, and intralaboratory precision.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. The developed and validated analytical procedure for the quantita­tive determination of caffeic acid in Nonea rossica herb by HPLC provides results with a relative standard deviation of ≤5.0%. The analytical procedure can be used to standardise the herbal drug Noneae rossicae herba for further use in medicinal practice.

нонея русскаякофейная кислотаВЭЖХвысокоэффективная жидкостная хроматографиявалидация аналитических методикрастительное сырьестандартизацияNonea rossicacaffeic acidHPLChigh-performance liquid chromatographyvalidation of analytical proceduresherbal drugstandardisationРабота выполнена без спонсорской поддержкиThe study was performed without external fundingReferencesДолганова ОМ, Величко ВВ, Карташова МЕ, Ершов КИ, Круглов ДС. Антикоагулянтная активность травы нонеи русской (Nonea rossica Steven). Journal of Siberian Medical Sciences. 2023;7(4):68–76. https://doi.org/10.31549/2542-1174-2023-7-4-68-76Dolganova OM, Velichko VV, Kartashova ME, Ershov KI, Kruglov DS. Anticoagulant activity of Nonea rossica Steven herb. Journal of Siberian Medical Sciences. 2023;7(4):68–76 (In Russ.). https://doi.org/10.31549/2542-1174-2023-7-4-68-76Величко ВВ, Карташова МЕ, Кучерова СД, Круглов ДС, Бурова ЛГ, Евстропов АН. Фитохимическая характеристика и антимикробные свойства экстрактов Nonea rossica (Bo­raginaceae). Растительные ресурсы. 2023;59(3):297–305. https://doi.org/10.31857/S0033994623030068Velichko VV, Kartashova ME, Kucherova SD, Kruglov DS, Burova LG, Evstropov AN. Phytochemical characteristics and antimicrobial effects of Nonea rossica (Boraginaceae) extracts. Rastitel`nye Resursy. 2023;59(3):297–305 (In Russ.). https://doi.org/10.31857/S0033994623030068Чиряпкин АС, Золотых ДС, Поздняков ДИ. Обзор биологической активности флавоноидов: кверцетина и кемпферола. Juvenis Scientia. 2023;9(2):5–20. https://doi.org/10.32415/jscientia_2023_9_2_5-20Chiriapkin AS, Zolotykh DS, Pozdnyakov DI. Review of biological activity of flavonoids: Quercetin and kaempferol. Juvenis Scientia. 2023;9(2):5–20 (In Russ.). https://doi.org/10.32415/jscientia_2023_9_2_5-20Бояринцев ДИ, Калинин ЕП, Ральченко ИВ, Рудзевич ЕЛ. Природные соединения с антикоагулянтным действием (обзор). Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2019;22(2):3−10. https://doi.org/10.29296/25877313-2019-02-01Boyarintsev DI, Kalinin EP, Ralchenko IV, Rudzevich EL. Natural compounds with anticoagulant action (review). Problems of Biological, Medical and Pharmaceutical Chemistry. 2019;22(2):3−10 (In Russ.). https://doi.org/10.29296/25877313-2019-02-01Olennikov DN, Kartashova ME, Velichko VV, Kruglov DS. New flavonoids from Nonea rossica and Tournefortia sibirica. Chem Nat Compd. 2022;58(6):1021–5. https://doi.org/10.1007/s10600-022-03858-9Olennikov DN, Kartashova ME, Velichko VV, Kruglov DS. New flavonoids from Nonea rossica and Tournefortia sibirica. Chem Nat Compd. 2022;58(6):1021–5. https://doi.org/10.1007/s10600-022-03858-9Khan F, Bamunuarachchi NI, Tabassum N, Kim YM. Caffeic acid and its derivatives: Antimicrobial drugs toward microbial pathogens. J Agric Food Chem. 2021;69(10):2979–3004. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.0c07579Khan F, Bamunuarachchi NI, Tabassum N, Kim YM. Caffeic acid and its derivatives: Antimicrobial drugs toward microbial pathogens. J Agric Food Chem. 2021;69(10):2979–3004. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.0c07579Лужанин ВГ, Уэйли АК, Понкратова АО, Новикова ВВ, Безверхняя ЕА. Противомикробная активность соединений полифенольной природы. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022;11(2):65–72. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-65-72Luzhanin VG, Whaley AK, Ponkratova AO, Novikova VV, Bezverkhniaia EA. Antimicrobial activity of polyphenolic compounds. Drug Development & Registration. 2022;11(2):65–72 (In Russ.). https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-65-72Choi J-H, Park S-E, Kim S-J, Kim S. Kaempferol inhibits thrombosis and platelet activation. Biochimie. 2015;115:177–86. https://doi.org/10.1016/j.biochi.2015.06.001Choi J-H, Park S-E, Kim S-J, Kim S. Kaempferol inhibits thrombosis and platelet activation. Biochimie. 2015;115:177–86. https://doi.org/10.1016/j.biochi.2015.06.001Belay A. Spectrophotometric method for the determination of caffeic acid complexation and thermodynamic properties. Int J Biophys. 2012;2(2):12–7. https://doi.org/10.5923/j.biophysics.20120202.01Belay A. Spectrophotometric method for the determination of caffeic acid complexation and thermodynamic properties. Int J Biophys. 2012;2(2):12–7. https://doi.org/10.5923/j.biophysics.20120202.01Компанцева ЕВ, Айрапетова АЮ, Саушкина АС. Определение гидроксикоричных кислот в растительном сырье спектрофотометрическим методом. Часть 1. Прямая спектрофотометрия (обзор). Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2024;14(2):181–95. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2024-14-2-181-195Kompantseva EV, Ayrapetova AYu, Saushkina AS. Spectrophotometric determination of hydroxycinnamic acids in herbal drugs. Part 1. Direct spectrophotometry (review). Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. Regulatory Research and Medicine Evaluation. 2024;14(2):181–95 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/1991-2919-2024-14-2-181-195Awwad S, Issa R, Alnsour L, Albals D, Al-Momani I. Quantification of caffeine and chlorogenic acid in green and roasted coffee samples using HPLC-DAD and evaluation of the effect of degree of roasting on their levels. Molecules. 2021;26(24):7502. https://doi.org/10.3390/molecules26247502Awwad S, Issa R, Alnsour L, Albals D, Al-Momani I. Quantification of caffeine and chlorogenic acid in green and roasted coffee samples using HPLC-DAD and evaluation of the effect of degree of roasting on their levels. Molecules. 2021;26(24):7502. https://doi.org/10.3390/molecules26247502Gerasimova V, Kaloyanov N, Karsheva M, Peycheva MF, Stoilova NA. HPLC-DAD method for simultaneous determination of natural polyphenols. Open J Anal Bioanal Chem. 2019;3(1):39–43. https://doi.org/10.17352/ojabc.000009Gerasimova V, Kaloyanov N, Karsheva M, Peycheva MF, Stoilova NA. HPLC-DAD method for simultaneous determination of natural polyphenols. Open J Anal Bioanal Chem. 2019;3(1):39–43. https://doi.org/10.17352/ojabc.000009Коломиец НЭ, Калинкина ГИ, Сапронова НН. Стандартизация листьев крапивы двудомной. Фармация. 2011;(6):22–4. EDN: OEELALKolomiyets NE, Kalinkina GI, Sapronova NN. Standardization of stinging nettle (Urtica dioica) leaves. Pharmacy. 2011;(6):22–4 (In Russ.). EDN: OEELALZhang Z, Zhang W, Tu J, Li Y, Xu G, Zhang Y. Simultaneous detection of protocatechuic acid, chlorogenic acid and caffeic acid in honey by HPLC with ultraviolet and electrochemical detectors. Int J Electrochem Sci. 2018;13(7):6655–65. https://doi.org/10.20964/2018.07.44Zhang Z, Zhang W, Tu J, Li Y, Xu G, Zhang Y. Simultaneous detection of protocatechuic acid, chlorogenic acid and caffeic acid in honey by HPLC with ultraviolet and electrochemical detectors. Int J Electrochem Sci. 2018;13(7):6655–65. https://doi.org/10.20964/2018.07.44Нестерова НВ, Самылина ИА, Бобкова НВ, Кузьменко АН, Краснюк ИИ, Евграфов АА. Количественное определение гидроксикоричных кислот и анализ динамики их накопления в листьях яблони лесной. Вестник Московского университета. Серия 2: Химия. 2019;60(1):60–4. EDN: YTIALBNesterova NV, Samylina IA, Bobkova NV, Kuzmenko AN, Krasnyuk II, Evgrafov AA. Quantitative determination of hydroxycoric acids and the analysis of the dynamics of their accumulation in the leaves of the Malus sylvestris. Moscow University Chemistry Bulletin. 2019;60(1):60–4 (In Russ.). EDN: YTIALBLee H-D, Paje LA, Lee S, Kang KS, Hong K, Kwon H, Lee S. Optimization of an analytical HPLC-DAD method for detecting hydroxycinnamic acid derivatives from mixtures of Saussurea grandifolia and Taraxacum coreanum. Appl Biol Chem. 2021;64:49. https://doi.org/10.1186/s13765-021-00622-5Lee H-D, Paje LA, Lee S, Kang KS, Hong K, Kwon H, Lee S. Optimization of an analytical HPLC-DAD method for detecting hydroxycinnamic acid derivatives from mixtures of Saussurea grandifolia and Taraxacum coreanum. Appl Biol Chem. 2021;64:49. https://doi.org/10.1186/s13765-021-00622-5Wang H, Provan GJ, Helliwell K. Determination of rosmarinic acid and caffeic acid in aromatic herbs by HPLC. Food Chem. 2004;87(2):307–11. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2003.12.029Wang H, Provan GJ, Helliwell K. Determination of rosmarinic acid and caffeic acid in aromatic herbs by HPLC. Food Chem. 2004;87(2):307–11. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2003.12.029Ishwarya M, Narendhirakannan RT. HPTLC method for quantitative determination of hydroxycinnamic acid derivatives in Solanum lycopersicum. Bangladesh J Pharmacol. 2018;13(2):137–41. https://doi.org/10.3329/bjp.v13i2.34461Ishwarya M, Narendhirakannan RT. HPTLC method for quantitative determination of hydroxycinnamic acid derivatives in Solanum lycopersicum. Bangladesh J Pharmacol. 2018;13(2):137–41. https://doi.org/10.3329/bjp.v13i2.34461Morlock GE. High-performance thin-layer chromatography combined with effect directed assays and high-resolution mass spectrometry as an emerging hyphenated technolo­gy: A tutorial review. Anal Chim Acta. 2021;1180:338644. https://doi.org/10.1016/j.aca.2021.338644Morlock GE. High-performance thin-layer chromatography combined with effect directed assays and high-resolution mass spectrometry as an emerging hyphenated technolo­gy: A tutorial review. Anal Chim Acta. 2021;1180:338644. https://doi.org/10.1016/j.aca.2021.338644Карташова МЕ, Величко ВВ, Круглов ДС. Товароведческие показатели лекарственного растительного сырья «Нонеи русской трава». В кн.: Лужанин ВГ, ред. Кромеровские чтения 2024. Пермь; 2024.Kartashova ME, Velichko VV, Kruglov DS. Commodity science indicators of medicinal plant raw materials Nonea herb. In: Luzhanin VG, ed. Kromer Readings 2024. Perm; 2024 (In Russ.).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.