vedomostiregmedРегуляторные исследования и экспертиза лекарственных средствRegulatory Research and Medicine Evaluation3034-30623034-3453Federal State Budgetary Institution ‘Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI ‘SCEEMP’)10.30895/1991-2919-2024-14-3-317-329vedomostiregmed-603Research ArticleБИОАНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫBIOANALYTICAL METHODSВалидация методики оценки биологической активности лекарственного препарата на основе тоцилизумаба и определение критериев приемлемости результатов анализаValidation of an Analytical Procedure for Evaluating the Biological Activity of a Medicinal Product Based on Tocilizumab and Determination of Acceptance Criteria for Test Resultshttps://orcid.org/0009-0007-9522-2587НиконоваЮ. А.NikonovaYu. A.

Никонова Юлия Александровна

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Yulia A. Nikonova

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

yanikonova@ibcgenerium.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5841-7587АббасоваС. Г.AbbasovaS. G.

Аббасова Светлана Георгиевна, д-р биол. наук

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Svetlana G. Abbasova, Dr. Sci. (Biol.)

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

https://orcid.org/0000-0003-4132-5971КаргополоваП. Е.KargopolovaP. E.

Каргополова Полина Евгеньевна

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Polina E. Kargopolova

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

https://orcid.org/0000-0003-0023-0028СтрижаковаО. М.StrizhakovaO. M.

Стрижакова Ольга Михайловна, канд. вет. наук

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Olga M. Strizhakova, Cand. Sci. (Vet.)

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

https://orcid.org/0000-0002-9058-1106ЛягоскинИ. В.LyagoskinI. V.

Лягоскин Иван Владимирович, канд. биол. наук

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Ivan V. Lyagoskin, Cand. Sci. (Biol.)

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

https://orcid.org/0009-0004-1418-6528ВасильевА. П.VasilevA. P.

Васильев Александр Павлович, канд. биол. наук

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Alexandr P. Vasilev, Cand. Sci. (Biol.)

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

https://orcid.org/0000-0002-5099-3050ПершинА. С.PershinA. S.

Першин Андрей Сергеевич, канд. вет. наук

Владимирская ул., д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский р-н, Владимирская обл., 601125

Andrey S. Pershin, Cand. Sci. (Vet.)

14 Vladimirskaya St., Volginsky, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

Акционерное общество «ГЕНЕРИУМ»РоссияGENERIUM JSCRussian Federation202419062024143317329Copyright © Никонова Ю.А., Аббасова С.Г., Каргополова П.Е., Стрижакова О.М., Лягоскин И.В., Васильев А.П., Першин А.С., 20242024Никонова Ю.А., Аббасова С.Г., Каргополова П.Е., Стрижакова О.М., Лягоскин И.В., Васильев А.П., Першин А.С.Nikonova Y.A., Abbasova S.G., Kargopolova P.E., Strizhakova O.M., Lyagoskin I.V., Vasilev A.P., Pershin A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vedomostincesmp.ru/jour/article/view/603ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Для биоаналитических методик характерны бо́льшая вариабельность и меньшая устойчивость по сравнению с физико-химическими методиками в силу лабильности характеристик живых тест-систем. Поскольку в нормативных документах не определен единый подход к формированию перечня критериев пригодности системы и допустимых границ для полученных результатов, то их устанавливают на основании валидационных испытаний.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Получить экспериментальное подтверждение соответствия методики оценки биологической активности лекарственного средства на основе разрабатываемого биоаналога тоцилизумаба (GNR-087) валидационным требованиям и определить количественные границы критериев пригодности аналитической системы и приемлемости результатов анализа.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Биологическую активность биоаналога тоцилизумаба оценивали по ингибированию интерлейкин-6-зависимой секреции эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), продуцируемой клетками репортерной линии HEK-Blue™ IL-6. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программного обеспечения Prism 6.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Специфичность методики подтверждена дозозависимым ингибированием интерлейкин-6-зависимой секреции эмбриональной щелочной фосфатазы клетками при действии тоцилизумаба. Методика линейна, коэффициент детерминации линейной функции R2≥0,99. Прецизионность методики удовлетворительная, сходимость — от 2 до 9%, внутрилабораторная прецизионность — 9 и 14%. Коэффициенты выявления активности (Rc) модельных образцов с симулированной активностью от 60 до 140%, в том числе и «слепых проб», находились в диапазоне 80–120%. Теоретические значения относительной специфической активности (RP) находились внутри доверительных интервалов средних найденных значений RP, что подтвердило правильность методики. Подтверждена устойчивость методики к контролируемым изменениям: использованию репортерных клеток разных пассажей (коэффициент вариации (CVRP) составил 10%), замене лотов ИЛ-6 (CVRP=1%) и реагента для детекции SEAP (CVRP=3%), при этом значение Rc находилось в диапазоне 80–120% от номинального значения RP.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Методика оценки биологической активности биоаналога тоцилизумаба соответствует валидационным характеристикам, таким как правильность, линейность, прецизионность, специфичность и устойчивость к контролируемым изменениям. Установлены границы критериев пригодности системы и рассчитаны критерии приемлемости результатов биологического анализа. Разработанная методика может служить как для рутинного контроля биологической активности, так и для использования в исследованиях при доказательстве биоподобия разрабатываемых препаратов оригинальному (референтному) препарату, содержащему тоцилизумаб.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. Bioanalytical techniques are characterised by greater variability and lower stability than physicochemical methods because live test systems are inherently labile. Since regulatory standards do not establish a unified approach, the selection of system suitability criteria and acceptance criteria for test results is based on validation studies.

AIM

AIM. This study aimed to validate an analytical procedure for evaluating the biological activity of a medicinal product based on the investigational tocilizumab biosimilar GNR-087 and determine the quantitative limits for system suitability criteria and acceptance criteria for test results.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. The biological activity of the investigational tocilizumab biosimilar was assessed by the inhibition of IL-6-induced secreted embryonic alkaline phosphatase (SEAP) expression by HEK-Blue™ IL-6 cells. Statistical processing of the obtained results was performed using Prism 6.0 software.

RESULTS

RESULTS. The specificity of the analytical procedure was confirmed by the dose-dependent inhibition of IL-6-induced SEAP expression by cells observed with tocilizumab. The analytical procedure was linear, with a coefficient of determination R2≥ 0.99. The precision of the analytical procedure was satisfactory; its repeat ability varied from 2 to 9%, and its intermediate precision was 14%. The recovery coefficients (Rc) for spiked samples simulating activity levels of 60–140%, including blinded samples, ranged from 80 to 120%. The theoretical values of relative potency (RP) were within the confidence intervals of the mean relative potency estimates, which confirmed the accuracy of the analytical procedure. The validation confirmed the robustness of the analytical procedure to controlled variations, including the use of reporter cells at different passages (with a coefficient of variation for relative potency estimates (CVRP) of 10%), different IL-6 lots (with a CVRP of 1%), and different SEAP detection reagent lots (with a CVRP of 3%); the Rc remained in the range of 80–120% of the nominal RP value.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. The analytical procedure for evaluating the biological activity of the investigational tocilizumab biosimilar meets the validation criteria, including accuracy, linearity, precision, specificity, and robustness. The study established system suitability criteria and acceptable limits for biological assay results. This analytical procedure can be used both for routine biological activity control and for demonstrating the biosimilarity of new medicinal products to the original (reference) tocilizumab-based medicinal product.

биологический анализспецифическая активностьвалидация аналитических методиккритерии приемлемости результатов анализакритерии пригодности системытоцилизумаббиологическая активностьинтерлейкин-6biological assaypotencyvalidation of analytical proceduresacceptance criteria for test resultssystem suitability criteriatocilizumabbiological activityinterleukin-6Работа выполнена при спонсорской поддержке АО «ГЕНЕРИУМ».The study reported in this paper was carried out with the financial support of GENERIUM JSC.ReferencesRose-John S, Scheller J, Elson G, Jones S. Interleukin-6 biology is coordinated by membrane-bound and soluble receptors: role in inflammation and cancer. J Leukoc Biol. 2006;80(2):227–36. https://doi.org/10.1189/jlb.1105674Rose-John S, Scheller J, Elson G, Jones S. Interleukin-6 biology is coordinated by membrane-bound and sol- uble receptors: role in inflammation and cancer. J Leukoc Biol. 2006;80(2):227–36. https://doi.org/10.1189/jlb.1105674Genovese MC, McKay JD, Nasonov EL, Mysler EF, da Silva NA, Alecock E, et al. Interleukin-6 receptor inhibition with tocilizumab reduces disease activity in rheumatoid arthritis with inadequate response to disease-modifying antirheumatic drugs: the tocilizumab in combination with traditional disease-modifying antirheumatic drug therapy study. Arthritis Rheum. 2008;58(10):2968–80. https://doi.org/10.1002/art.23940Genovese MC, McKay JD, Nasonov EL, Mysler EF, da Silva NA, Alecock E, et al. Interleukin-6 receptor inhibition with tocilizumab reduces disease activity in rheumatoid ar- thritis with inadequate response to disease-modifying antirheumatic drugs: the tocilizumab in combination with traditional disease-modifying antirheumatic drug therapy study. Arthritis Rheum. 2008;58(10):2968–80. https://doi.org/10.1002/art.23940Насонов ЕЛ. Иммунопатология и иммунофармакотерапия коронавирусной болезни 2019 (COVID-19): фокус на интерлейкин 6. Научно-практическая ревматология. 2020;58(3):245–61. https://doi.org/10.14412/1995-4484-2020-245-261Nasonov EL. Immunopathology and immunopharmacotherapy of coronavirus disease 2019 (COVID-19): focus on interleukin 6. Rheumatology Science and Practice. 2020;58(3):245–61 (In Russ.). https://doi.org/10.14412/1995-4484-2020-245-261Sebba A. Tocilizumab: The first interleukin-6-receptor inhibitor. Am J Health Syst Pharm. 2008;65(11):1413–8. https://doi.org/10.2146/ajhp070449Sebba A. Tocilizumab: The first interleukin-6-receptor inhibitor. Am J Health Syst Pharm. 2008;65(11):1413–8. https://doi.org/10.2146/ajhp070449White J, Abodeely M, Ahmed S, Debauve G, Johnson E, Meyer D, et al. Best practices in bioassay development to support registration of biopharmaceuticals. Biotechniques. 2019;67(3):126–37. https://doi.org/10.2144/btn-2019-0031White J, Abodeely M, Ahmed S, Debauve G, Johnson E, Meyer D, et al. Best practices in bioassay development to support registration of biopharmaceuticals. Biotechniques. 2019;67(3):126–37. https://doi.org/10.2144/btn-2019-0031Miao S, Fan L, Zhao L, Ding D, Liu X, Wang H, Tan WS. Physicochemical and biological characterization of the proposed biosimilar tocilizumab. Biomed Res Int. 2017;2017:4926168. https://doi.org/10.1155/2017/4926168Miao S, Fan L, Zhao L, Ding D, Liu X, Wang H, Tan WS. Physicochemical and biological characterization of the proposed biosimilar tocilizumab. Biomed Res Int. 2017;2017:4926168. https://doi.org/10.1155/2017/4926168Robinson J, Sadick M, Deming S, Estdale S, Bergelson S, Little L. Assay acceptance criteria for multiwell-plate-based biological potency assays. BioProcess Int. 2014;12(1):30–41.Robinson J, Sadick M, Deming S, Estdale S, Bergelson S, Little L. Assay acceptance criteria for multiwell-plate-based biological potency assays. BioProcess Int. 2014;12(1):30–41.Little TA, Harding DS. Establishing systems suitability and validity criteria for analytical methods and bioassays. BioPharma Outsourcing Innovation, Pharmaceutical Technology (February 2022). https://www.pharmtech.com/view/establishing-systems-suitability-and-validity-criteria-for-analytical-methods-and-bioassaysLittle TA, Harding DS. Establishing systems suitability and validity criteria for analytical methods and bioassays. BioPharma Outsourcing Innovation, Pharmaceutical Technology (February 2022). https://www.pharmtech.com/view/establishing-systems-suitability-and-validity-criteria-for-analytical-methods-and-bioassays

The authors declare that there are no conflicts of interest present.