vedomostiregmedРегуляторные исследования и экспертиза лекарственных средствRegulatory Research and Medicine Evaluation3034-30623034-3453Federal State Budgetary Institution ‘Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI ‘SCEEMP’)10.30895/1991-2919-2023-531vedomostiregmed-531Research ArticleРАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК ИССЛЕДОВАНИЯDEVELOPMENT AND VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURESРазработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи крушиновидной методом спектрофотометрииDevelopment and Validation of a Procedure for Quantitative Determination of Flavonoids in Sea Buckthorn Leaves by Spectrophotometryhttps://orcid.org/0000-0002-3507-5665КовалёваН. А.KovalevaN. A.

Ковалёва Наталья Александровна

Университетская пл., д. 1, Воронеж, 394018

Natalia A. Kovaleva

1 Universitetskaya Sq., Voronezh 394018

natali-sewer@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1421-5067ТринееваО. В.TrineevaO. V.

Тринеева Ольга Валерьевна - доктор фармацевтических наук, доцент.

Университетская пл., д. 1, г. Воронеж, 394018

Olga V. Trineeva - Dr. Sci. (Pharm.), Associate Professor.

1 Universitetskaya Sq., Voronezh 394018

trineevaov@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5333-0781ЧувиковаИ. В.ChuvikovaI. V.

Чувикова Ирина Вячеславовна

Университетская пл., д. 1, Воронеж, 394018

Irina V. Chuvikova

1 Universitetskaya Sq., Voronezh 394018

ira.chuvikova.01@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6934-0837СливкинА. И.SlivkinA. I.

Сливкин Алексей Иванович - доктор фармацевтических наук, профессор.

Университетская пл., д. 1, г. Воронеж, 394018

Alexey I. Slivkin - Dr. Sci. (Pharm.), Professor.

1 Universitetskaya Sq., Voronezh 394018

slivkin@pharm.vsu.ruФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Воронежский государственный университет»РоссияVoronezh State UniversityRussian Federation202326062023132216226Copyright © Ковалёва Н.А., Тринеева О.В., Чувикова И.В., Сливкин А.И., 20232023Ковалёва Н.А., Тринеева О.В., Чувикова И.В., Сливкин А.И.Kovaleva N.A., Trineeva O.V., Chuvikova I.V., Slivkin A.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vedomostincesmp.ru/jour/article/view/531

Плоды облепихи крушиновидной — фармакопейное сырье для получения облепихового масла. Другие части растения (кора, листья, побеги) являются объектами исследований с целью расширения сырьевой базы и рационального использования ограниченных природных ресурсов. Листья облепихи крушиновидной богаты различными биологически активными соединениями, одними из которых являются флавоноиды.

Цель работы

Цель работы: разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи с использованием спектрофотометрии в видимой области спектра.

Материалы и методы

Материалы и методы: объектом исследования являлись высушенные листья облепихи крушиновидной трех фенологических фаз (I — фаза завязывания плодов, II — фаза единичного созревания плодов, III — фаза массового созревания пло дов), заготовленные в 2022 г. от дикорастущих растений в Воронежской области. Для количественного определения флавоноидов в листьях облепихи была использована методика, основанная на измерении оптической плотности раствора, содержащего продукты взаимодействия флавоноидов с алюминия хлоридом.

Результаты

Результаты: максимум поглощения комплекса спиртового извлечения из листьев облепихи крушиновидной с алюминия хлоридом наблюдался при 402±2 нм, что соответствует максимуму поглощения лютеолина. Оптимальные параметры экстрагирования: экстрагент — спирт этиловый 70%; соотношение сырье : экстрагент — 1:150; степень измельчения — 0,5 мм; кратность экстракции — однократная; время экстракции — 45 мин.

Выводы

Выводы: разработана и валидирована методика количественного спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в листьях облепихи крушиновидной, которая может быть использована для стандартизации данного лекарственного растительного сырья (ЛРС). Установлено, что наибольшее содержание суммы флавоноидов (до 1,5%) характерно для сырья, заготовленного в фенологическую фазу I (середина июня). Содержание флавоноидов постепенно снижается к середине июля и концу августа. В связи с тем что облепиха крушиновидная является источником получения облепихового масла, а ранний сбор листьев может привести к снижению его ценности и несоответствию фармакопейным требованиям, предложено выбрать рекомендуемый срок заготовки листьев, совпадающий со сбором плодов, так как листья на данном этапе роста и развития еще содержат достаточное количество флавоноидов (до 0,8%) и могут быть использованы как самостоятельное ЛРС.

Sea buckthorn fruits are a pharmacopoeial raw material used to produce sea buckthorn oil. Other parts of the plant (bark, leaves, and shoots) are objects of research aiming to expand the raw material base and use limited natural resources rationally. Sea buckthorn leaves are rich in biologically active compounds, including flavonoids.

The aim of the study was to develop and validate an analytical procedure for the quantification of flavonoids in sea buckthorn leaves using spectrophotometry in the visible spectral region.

Materials and methods

Materials and methods. The study focused on dried leaves of sea buckthorn harvested in the Voronezh region in 2022. These leaves were collected from wild plants at three phenological stages: fruit setting (I), single fruit ripening (II), and mass fruit ripening (III). To quantify flavonoids in sea buckthorn leaves, the authors used an analytical procedure based on measuring the absorbance of a solution containing products of the reaction between flavonoids and aluminium chloride.

Results

Results. The absorption maximum of the complex between the alcohol extract of sea buckthorn leaves and aluminium chloride was observed at 402±2 nm; the wavelength corresponds to the absorption maximum of luteolin. The optimal extraction conditions included 70% ethanol as the extraction solvent, a raw material to solvent ratio of 1:150, a particle size of 0.5 mm, and a single extraction cycle of 45 min.

Conclusions

Conclusions. The authors developed and validated a spectrophotometric procedure for the quantification of total flavonoids, expressed as luteolin, in sea buckthorn leaves. The procedure can be used to standardise this herbal drug. As observed in the study, the total flavonoid content was the highest (up to 1.5%) in the raw material at phenological stage I (collected in mid-June) and gradually decreased through mid-July to the end of August. Since sea buckthorn is the source of sea buckthorn oil and the early collection of leaves may decrease its value or lead to non-compliance with pharmacopoeial requirements, the recommended time for harvesting leaves should coincide with that for harvesting fruits. Collected at this stage of growth and development, sea buckthorn leaves still contain sufficient flavonoids (up to 0.8%) and can be used as an individual herbal drug.

флавоноидылистья облепихи крушиновиднойфенологические фазывалидацияflavonoidssea buckthorn leavesphenological stagesvalidationРабота выполнена без спонсорской поддержкиThe study was performed without external fundingReferencesМихеев АМ, Деменко ВИ. Облепиха. М.: Росагропромиздат; 1990.Mikheev AM, Demenko VI. Sea buckthorn. Moscow: Rosagropromizdat; 1990 (In Russ.).Хасенова АБ, Аралбаева АН, Утегалиева РС, Маматаева АТ, Мурзахметова МК. Облепиха крушиновидная (Hippophae rhamnoides L.) — источник биоактивных веществ. Вестник Алматинского технологического университета. 2020;(1):82–8.Khassenova AB, Aralbaeva AN, Utegalyieva RS, Mamatayeva AT, Murzakhmetova MK. Sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) is a source of bioactive substances. The Journal of the Almaty Technological University. 2020;(1):82–8 (In Russ.). EDN: ITGNOGАбдыкаликова КА, Нечипоренко ЛП. Фитохимический состав надземной части облепихи крушиновидной. Естественные науки. 2008;(4):104–7.Phytochemical composition of the aboveground part of sea buckthorn. Natural Sciences. 2008;(4):104–7 (In Russ.). EDN: ZELKAQJaroszewska A, Biel W. Chemical composition and antioxidant activity of leaves of mycorrhized sea-buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). Chil J Agric Res. 2017;77(2):155–62. https://doi.org/10.4067/S0718-58392017000200155Jaroszewska A, Biel W. Chemical composition and antioxidant activity of leaves of mycorrhized sea-buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). Chil J Agric Res. 2017;77(2):155–62. https://doi.org/10.4067/S0718-58392017000200155Suryakumar G, Gupta A. Medicinal and therapeutic potential of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). J Ethnopharmacol. 2011;138(2):268–78. https://doi.org/10.1016/j.jep.2011.09.024Suryakumar G, Gupta A. Medicinal and therapeutic potential of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). J Ethnopharmacol. 2011;138(2):268–78. https://doi.org/10.1016/j.jep.2011.09.024Новрузов ЭН, Мамедов ЗГ, Мустафаева ЛА, Мирюсифова ХМ, Зейналова АМ. Состав и содержание флавоноидов листьев Hippophae rhamnoides L., произрастающих в Азербайджане. Химия растительного сырья. 2018;(3):209–14. https://doi.org/10.14258/jcprm.2018033772Novruzov EN, Mamedov ZG, Mustafaeva LA, Miryusifova KhM, Zeynalova AM. Composition and content of flavonoids of Hippophae rhamnoides L. leaves growing in Azerbaijan. Chemistry of Plant Raw Material. 2018;(3):209–14 (In Russ.). https://doi.org/10.14258/jcprm.2018033772Dharam PA, Amrit KS, Jyoti K, Tanveer N. Pharmacognostical characterization and preliminary phytochemical investigation of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) leaves. Indo Global Journal of Pharmaceutical Sciences. 2012;2(2):108–13. https://doi.org/10.35652/IGJPS.2012.13Dharam PA, Amrit KS, Jyoti K, Tanveer N. Pharmacognostical characterization and preliminary phytochemical investigation of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) leaves. Indo Global Journal of Pharmaceutical Sciences. 2012;2(2):108–13. https://doi.org/10.35652/IGJPS.2012.13Criste A, Urcan AC, Bunea A, Furtuna FRP, Olah NK, Madden RH, et al. Phytochemical composition and biological activity of berries and leaves from four Romanian sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) varieties. Molecules. 2020;25(5):1170. https://doi.org/10.3390/molecules25051170Criste A, Urcan AC, Bunea A, Furtuna FRP, Olah NK, Madden RH, et al. Phytochemical composition and biological activity of berries and leaves from four Romanian sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) varieties. Molecules. 2020;25(5):1170. https://doi.org/10.3390/molecules25051170Tkacz K, Wojdyło A, Turkiewicz P, Nowicka P. Triterpenoids, phenolic compounds, macroand microelements in anatomical parts of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries, branches and leaves. J Food Compos Anal. 2021;103:104107. https://doi.org/10.1016/j.jfca.2021.104107Tkacz K, Wojdyło A, Turkiewicz P, Nowicka P. Triterpenoids, phenolic compounds, macroand microelements in anatomical parts of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries, branches and leaves. J Food Compos Anal. 2021;103:104107. https://doi.org/10.1016/j.jfca.2021.104107Нилова ЛП, Малютенкова СМ. Антиоксидантные комплексы облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) северо-запада России. Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий. 2021;83(1):108–14. https://doi.org/10.20914/2310-1202-2021-1-108-114Nilova LP, Malyutenkova SM. Antioxidant complexes of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) of northwest Russia. Proceedings of the Voronezh State University of Engineering Technologies. 2021;83(1):108–14 (In Russ.). https://doi.org/10.20914/2310-1202-2021-1-108-114Kumar MS, Dutta R, Prasad D, Misra K. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves for the comparative evaluation of antioxidant activity. Food Chem. 2011;127(3):1309–16. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2011.01.088Kumar MS, Dutta R, Prasad D, Misra K. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves for the comparative evaluation of antioxidant activity. Food Chem. 2011;127(3):1309–16. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2011.01.088Ji M, Gong X, Li X, Wang C, Li M. Advanced re search on the antioxidant activity and mechanism of polyphenols from Hippophae species—a review. Molecules. 2020;25(4):917. https://doi.org/10.3390/molecules25040917Ji M, Gong X, Li X, Wang C, Li M. Advanced re search on the antioxidant activity and mechanism of polyphenols from Hippophae species—a review. Molecules. 2020;25(4):917. https://doi.org/10.3390/molecules25040917Исачкин АВ, Зубик ИН, Потапова АВ, Ермаков МА. Корреляционный анализ фенофаз и феноинтервалов у сортов облепихи крушиновидной (Hippophaе rhamnoides L.) в коллекции ГБС РАН им. Н.В. Цицина. Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. 2019;(2):64–9.Isachkin AV, Zubik IN, Potapova AV, Ermakov MA. Correlation analysis of phenophases and pheno intervals in varieties of buckwheat (Hippophae rhamnoides L.) in the collection of GBS RAS IM. N.V.CYSTSINA. Bulletin of the Kursk State Agricultural Academy. 2019;(2):64–9 (In Russ.). EDN: ZBKJHVКорулькин ДЮ, Абилов ЖА, Музычкина РА, Толстиков ГА. Природные флавоноиды. Новосибирск: Тео; 2007.Korul’kin DYu, Abilov ZhA, Muzychkina RA, Tolstikov GA. Natural flavonoids. Novosibirsk: Geo; 2007 (In Russ.).Лесовая ЖС, Писарев ДИ, Новиков ОО, Романова ТА. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. 2010;22–2(93):145–9.Lesovaya ZhS, Pisarev DI, Novikov OO, Romanova TA. Development of methods of quantitative determination of flavonoids in Alchemilla vulgaris L.S.L. Belgorod State University Scientific Bulletin. Series: Medicine. Pharmacy. 2010;22–2(93):145–9 (In Russ.). EDN: NDAWKLДроздова ИЛ, Лупилина ТИ. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в траве икотника серого. Человек и его здоровье. 2016;(1):106–12.Drozdova IL, Lupilina TI. Development and validation of methods of quantitative determination of flavonoids in Berteroa incana herb. Humans and Their Health. 2016;(1):106–12 (In Russ.). EDN: VSZEKVТринеева ОВ, Рудая МА, Перова ИБ, Сливкин АИ, Эллер КИ. Изучение профиля флавоноидов пло дов облепихи крушиновидной различных сортов. Биофармацевтический журнал. 2021;13(3):22–9. https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-3-22-29Trineeva OV, Rudaya MA, Perova IB, Slivkin AI, Eller KI. Studying the profile of flavonoids of fruits of sea buckthorn various varieties. Russian Journal of Biopharmaceuticals. 2021;13(3):22–9 (In Russ.). https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-3-22-29Олешко ОА, Кондратьева НА. Определение подлинности и количественного содержания биологически активных веществ в экстракте неомикон сухом. Современные проблемы науки и образования. 2015;(2–3):238.Oleshko OA, Kondrateva NA. Determination of authenticity and the quantitative content of biologically active agents in neomicon extract dry. Modern Problems of Science and Education. 2015;(2– 3):238 (In Russ.). EDN: VBRFQTРудаков ОБ, Востров ИА, Федоров СВ, Филиппов АА, Селеменев ВФ, Приданцев АА. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж: Водолей; 2003.Rudakov OB, Vostrov IA, Fedorov SV, Filippov AA, Selemenev VF, Pridantsev AA. A chromatographer’s companion. Methods of liquid chromatography. Voronezh: Vodoley; 2003 (In Russ.).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.