vedomostiregmedРегуляторные исследования и экспертиза лекарственных средствRegulatory Research and Medicine Evaluation3034-30623034-3453Federal State Budgetary Institution ‘Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products’ of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI ‘SCEEMP’)10.30895/1991-2919-2020-10-3-192-200vedomostiregmed-305Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESВЭЖХ-МС/МС методика количественного определения силденафила и его метаболита в плазме крови человекаHPLC-MS/MS Method for Quantitation of Sildenafil and Its Active Metabolite in Human PlasmaРодионовГ. Г.RodionovG. G.

Родионов Геннадий Георгиевич, д-р мед. наук, доцент, SPIN-код РИНЦ: 6471-3933. 

ул. Академика Лебедева, д. 4/2, Санкт-Петербург, 194044

Gennady G. Rodionov, Dr. Sci. (Med.), SPIN-code RINC: 6471-3933

4/2 Academician Lebedev St., Saint Petersburg 194044

rodgengeor@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1840-5770ШантырьИ. И.ShantyrI. I.

Шантырь Игорь Игнатьевич, д-р мед. наук, профессор

ул. Академика Лебедева, д. 4/2, Санкт-Петербург, 194044

Igor I. Shantyr, Dr. Sci. (Med.), Professor

4/2 Academician Lebedev St., Saint Petersburg 194044

shantyr@arcerm.spb.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5857-3627УшалИ. Э.UshalI. E.

Ушал Инна Эдвардовна, канд. биол. наук

ул. Академика Лебедева, д. 4/2, Санкт-Петербург, 194044

Inna E. Ushal, Cand. Sci. (Biol.)

4/2 Academician Lebedev St., Saint Petersburg 194044

innaushal@mail.ruСветкинаЕ. В.SvetkinaE. V.

Светкина Екатерина Владимировна, SPIN-код РИНЦ:  4224-5518.

ул. Академика Лебедева, д. 4/2, Санкт-Петербург, 194044

Ekaterina V. Svetkina, SPIN-code RINC: 4224-5518

4/2 Academician Lebedev St., Saint Petersburg 194044

 

moerabo4eemilo@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-6369-4511КолобоваЕ. А.KolobovaE. A.

Колобова Екатерина Алексеевна, канд. хим. наук

ул. Академика Лебедева, д. 4/2, Санкт-Петербург, 194044

Ekaterina A. Kolobova, Cand. Sci. (Chem.)

4/2 Academician Lebedev St., Saint Petersburg 194044

ekatderyabina@mail.ruЗахаровК. А.ZakharovK. A.

Захаров Константин Анатольевич, канд. мед. наук, SPIN-код РИНЦ: 2537-4635.

пр-т Юрия Гагарина, д. 65, Санкт-Петербург, 196143

Konstantin A. Zakharov, Cand. Sci. (Med.), SPIN-code RINC: 2537-4635

65 Yuri Gagarin Ave., Saint Petersburg 196143

konstantin.zakharov@mail.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А. М. Никифорова» Министерства Российской Федерации по делам гражданской обороны, чрезвычайным ситуациям и ликвидации последствий стихийных бедствийРоссияNikiforov Russian Center of Emergency and Radiation MedicineRussian FederationОбщество с ограниченной ответственностью «Научно-исследовательский центр Эко-Безопасность»РоссияEco-Safety Research Center, LLCRussian Federation202028062020103192200Copyright © Родионов Г.Г., Шантырь И.И., Ушал И.Э., Светкина Е.В., Колобова Е.А., Захаров К.А., 20202020Родионов Г.Г., Шантырь И.И., Ушал И.Э., Светкина Е.В., Колобова Е.А., Захаров К.А.Rodionov G.G., Shantyr I.I., Ushal I.E., Svetkina E.V., Kolobova E.A., Zakharov K.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.vedomostincesmp.ru/jour/article/view/305

В силу высокой востребованности препаратов на основе силденафила актуальна разработка методик о ния силденафила в биосубстратах для обеспечения проведения фармакокинетического анализа при исследованиях биоэквивалентности лекарственных средств. Для разработки методики предложено использовать метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) как высокочувствительный, селективный, обладающий высокой воспроизводимостью и производительностью. Цель работы: разработка и валидация ВЭЖХМС/МС методики количественного определения силденафила и его активного метаболита N-десметилсилденафила в плазме крови человека. Апробация разработанной методики при изучении фармакокинетических профилей силденафила и N-десметилсилденафила у здоровых добровольцев в исследовании биоэквивалентности препарата силденафила в форме спрея. Материалы и методы: методика реализована на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent 1200 с тройным квадруполем Agilent 6440, хроматографическая колонка Poroshell 120 EC-C18 4,6 м × 150 мм × 2,7 мкм. Для приготовления калибровочных образцов использовались стандарты с чистотой 99,5 и 98,5% для силденафила цитрата и N-десметилсилденафила соответственно, в качестве внутреннего стандарта использовался варденафил. Изучение фармакокинетических профилей силденафила и N-десметилсилденафила проведено у 44 здоровых добровольцев мужского пола в рамках исследования биоэквивалентности препаратов, одобренного Минздравом России. Первичную обработку данных проводили с помощью программного обеспечения Mass Hunter версия B 06.00, статистическую обработку — с помощью Microsoft Office Excel 2010 и Statistica 6.1. Результаты: разработана и валидирована методика определения силденафила и его активного метаболита N-десметилсилденафила в плазме человека. Разработанная методика успешно использована для изучения фармакокинетических профилей указанных соединений у здоровых добровольцев. Выводы: разработанная методика определения силденафила и его активного метаболита N-десметилсилденафила в плазме крови человека является простой, воспроизводимой, быстрой и надежной. По результатам фармакокинетических исследований с использованием разработанной методики изучаемый препарат и препарат сравнения были признаны биоэквивалентными.

A high demand for sildenafil-based drugs puts a premium on the development of methods for quantitation of sildenafil in bio-substrates to facilitate pharmacokinetic analysis in bioequivalence studies. High performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was proposed for the method development due to its high sensitivity, selectivity, reproducibility, and performance. The aim of the study was to develop and validate an HPLC-MS/MS method for quantitative determination of sildenafil and its active metabolite N-desmethyl sildenafil in human plasma. Approbation of the developed technique in the study of the pharmacokinetic profiles of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in healthy volunteers in the study of the bioequivalence of the drug sildenafil in the form of a spray. Materials and methods: the method was implemented using the Agilent 1200 high-performance liquid chromatography system with the Agilent 6440 triple quadrupole system, and Poroshell 120 EC-C18 chromatographic column, 4.6 m × 150 mm × 2.7 μm. Calibration samples were prepared using sildenafil citrate and N-desmethyl sildenafil reference standards with 99.5 and 98.5% purity, respectively. Vardenafil was used as an internal standard. Pharmacokinetic profiles of sildenafil and N-desmethyl sildenafil were studied in 44 healthy male volunteers as part of a bioequivalence study approved by the Ministry of Health of the Russian Federation. The primary data processing was performed using Mass Hunter software version B 06.00, and statistical processing was performed using Microsoft Office Excel 2010 and Statistica 6.1. Results: the authors developed and validated a method for quantitation of sildenafil and its active metabolite N-desmethyl sildenafil in human plasma. The developed method was used successfully to study pharmacokinetic profiles of the discussed compounds in healthy volunteers. Conclusions: the developed method of quantitative determination of sildenafil and its active metabolite N-desmethyl sildenafil in human plasma is simple, reproducible, fast, and robust. The results of the pharmacokinetic studies using the developed method demonstrated bioequivalence of the test product and the reference product.

валидациясилденафилN-десметилсилденафилбиоэквивалентностьВЭЖХ-МС/МСvalidationsildenafilN-desmethyl sildenafilbioequivalenceHPLC-MS/MSИсследование биоэквивалентности лекарственных форм силденафила проведено по Протоколу № ПТ-КИ-005-001-01 Версия 1.0 от 27.01.2017 г. «Открытое рандомизированное сбалансированное перекрестное исследование биоэквивалентности в двух периодах, двух последовательностях с однократным приемом внутрь 50 мг лекарственного препарата Джент, спрей для приема внутрь дозированный, 12,5 мг/доза, ООО НПО «ФармВИЛАР», Россия, и 50 мг лекарственного препарата Виагра® , таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг, Фарева Амбуаз, Франция (держатель РУ — Пфайзер Инк, США) у взрослых здоровых добровольцев натощак». Спонсор исследования ООО «Фармамед», Россия.The bioequivalence study of sildenafil dosage forms was performed according to Protocol No. PT-KI-005-001-01 Version 1.0 of January 27, 2017. “An open-label, randomised, balanced, cross-over, single-dose, two-period, two-sequence bioequivalence study of 50 mg of Gent, metered-dose oral spray, 12.5 mg/dose, produced by OOO NPO FarmVILAR, Russia, and 50 mg of Viagra® , film-coated tablets, 50 mg, produced by Fareva Amboise, France (marketing authorisation holder—Pfizer Inc., USA) in adult healthy volunteers under fasting”. The study was sponsored by Farmamed LLC, Russia.ReferencesАхвледиани НД, Матюхов ИП. Современное место силденафила в лечении эректильной дисфункции. Урология. 2018;(2):142–6. https://doi.org/10.18565/urology.2018.2.142-146Akhvlediani ND, Matyukhov IP. Current role of sildenafil in the management of erectile dysfunction. Urologiya = Urology. 2018;(2):142–6 (In Russ.) https://doi.org/10.18565/urology.2018.2.142-146Кузнецов ИЭ, Науменко ЕА, Резниченко НК, Костюк АЮ, Савяк РП, Олейников ДС. Разработка и валидация методики количественного определения силденафила и N-десметилсилденафила с помощью ВЭЖХ-МС/МС в плазме крови человека. ScienceRise: Pharmaceutical Science. 2017;1(5):22–32. https://doi.org/10.15587/2519-4852.2017.92823Kuznetsov IE, Naumenko EA, Reznichenko NK, Kostyuk AYu, Savyak RP, Oleynikov DS. Development and validation of method for quantitative determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil by HPLC-MS/MS in human blood plasma. ScienceRise: Pharmaceutical Science. 2017;1(5):22–32 (In Russ.) https://doi.org/10.15587/2519-4852.2017.92823Tripathi AS, Sheikh I, Dewani AP, Shelke PG, Bakal RL, Chandewar AV, et al. Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies. Saudi Pharm J. 2013;21(3):317–21. https://doi.org/10.1016/j.jsps.2012.09.003Tripathi AS, Sheikh I, Dewani AP, Shelke PG, Bakal RL, Chandewar AV, et al. Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies. Saudi Pharm J. 2013;21(3):317–21. https://doi.org/10.1016/j.jsps.2012.09.003Reddy BPK, Reddy YR. Validation and stability indicating RP-HPLC method for the determination of sildenafil citrate in pharmaceutical formulations and human plasma. J Chem. 2008;5(S2):1117–22. https://doi.org/10.1155/2008/682924Reddy BPK, Reddy YR. Validation and stability indicating RP-HPLC method for the determination of sildenafil citrate in pharmaceutical formulations and human plasma. J Chem. 2008;5(S2):1117–22. https://doi.org/10.1155/2008/682924Al-Ghazawi M, Tutunji M, AbuRuza S. Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study. J Pharm Biomed Anal. 2007;43(2):613–8. https://doi.org/10.1016/j. jpba.2006.07.028Al-Ghazawi M, Tutunji M, AbuRuza S. Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study. J Pharm Biomed Anal. 2007;43(2):613–8. https://doi.org/10.1016/j. jpba.2006.07.028Haque A, Kumar N. Pharmacokinetics studies of sildenafil and its metabolite piperazine N-desmethyl sildenafil by using LC-MS/MS in human plasma. Int J Drug Dev Res. 2014;6(2):130–5.Haque A, Kumar N. Pharmacokinetics studies of sildenafil and its metabolite piperazine N-desmethyl sildenafil by using LC-MS/MS in human plasma. Int J Drug Dev Res. 2014;6(2):130–5.Samah SA, Bendas ER, Abdel-Fattah AA, Hegazy MA. Reversed phase high performance liquid chromatographic method for determination of sildenafil in human plasma and its application to a bioequivalence study. Bioeq Bioav Int J. 2017;1(3):1–7. https://doi.org/10.23880/BEBA-16000113Samah SA, Bendas ER, Abdel-Fattah AA, Hegazy MA. Reversed phase high performance liquid chromatographic method for determination of sildenafil in human plasma and its application to a bioequivalence study. Bioeq Bioav Int J. 2017;1(3):1–7. https://doi.org/10.23880/BEBA-16000113Ярошенко ДВ, Григорьев АВ, Сидорова АА, Карцова ЛА. Хроматографическое определение силденафила в плазме крови с использованием спектрофотометрического и масс-спектрометрического детектирования. Журнал аналитической химии. 2013;68(9):886–94. https://doi.org/10.1134/S1061934813090128Yaroshenko DV, Grigoriev AV, Sidorova AA, Kartsova LA. Chromatographic determination of sildenafil in blood plasma using spectrophotometric and mass-spectrometric detection. J Anal Chem. 2013;68(9):801–8. https://doi.org/10.1134/S1061934813090128Simiele M, Pensi D, Pasero D, Ivaldi F, Rinaldi M, Di Perri G, et al. Development and validation of an ultra performance liquid chromatography tandem mass method for sildenafil and N-desmethyl sildenafil plasma determination and quantification. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2015;1001:35–40. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2015.07.023Simiele M, Pensi D, Pasero D, Ivaldi F, Rinaldi M, Di Perri G, et al. Development and validation of an ultra performance liquid chromatography tandem mass method for sildenafil and N-desmethyl sildenafil plasma determination and quantification. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2015;1001:35–40. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2015.07.023El-Bagary R, Azzazy HME, ElKady EF, Farouk F. Simultaneous determination of sildenafil citrate and some nitric oxide releasing drugs in human plasma using UPLC MS/MS. Clin Biochem. 2014;47(7–8):654–6. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2014.03.009El-Bagary R, Azzazy HME, ElKady EF, Farouk F. Simultaneous determination of sildenafil citrate and some nitric oxide releasing drugs in human plasma using UPLC MS/MS. Clin Biochem. 2014;47(7–8):654–6. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2014.03.009

The authors declare that there are no conflicts of interest present.