Косман Вера Михайловна - кандидат фармацевтических наук.
Заводская ул., 3, к. 245, г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл., 188663
Vera M. Kosman - Cand. Sci. (Pharm.).
3/245 Zavodskaya St., Kuzmolovsky settlement, Vsevolozhsky district,Leningrad region 188663
Карлина Марина Валерьевна - кандидат фармацевтических наук.
Заводская ул., 3, к. 245, г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл., 188663
Marina V. Karlina - Cand. Sci. (Pharm.).
3/245 Zavodskaya St., Kuzmolovsky settlement, Vsevolozhsky district,Leningrad region 188663
Пожарицкая Ольга Николаевна - кандидат фармацевтических наук.
Заводская ул., 3, к. 245, г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл., 188663
Olga N. Pozharitskaya - Cand. Sci. (Pharm.).
3/245 Zavodskaya St., Kuzmolovsky settlement, Vsevolozhsky district, Leningrad region 188663
Метод ВЭЖХ с УФ-детектированием широко используют для количественного анализа лекарственных веществ в биообразцах, полученных при изучении фармакокинетики, биоэквивалентности или лекарственного мониторинга. Основное ограничение связано со значимым фоновым влиянием матриц биообразцов, ограничивающим чувствительность ВЭЖХ-УФ-методик.
Цель работы: оценка влияния пробоподготовки и условий хроматографирования на уровень фонового сигнала при ВЭЖХ-УФ-анализе плазмы крови.
Материалы и методы: на примере трех типов плазмы крови (крысы, кролика и человека) рассмотрено влияние осадителя, режима центрифугирования, включения стадии твердофазной экстракции (ТФЭ) в процедуру подготовки проб на уровень фонового сигнала при анализе методом ВЭЖХ-УФ в трех хроматографических режимах при трех длинах волн.
Результаты: установлено, что уровень фонового сигнала практически не зависит от хроматографического режима, интенсивности центрифугирования и введения стадии ТФЭ; для плазмы крови человека и кролика уровень фонового сигнала имеет тенденцию к снижению по сравнению с сигналом плазмы крови крыс. Наибольшее значение на уровень фонового сигнала оказывает выбор осадителя при пробоподготовке и длина волны детектирования. Показано, что ацетонитрил предпочтительнее, чем метанол, а при выборе длины волны следует по возможности избегать ближневолновой области.
Выводы: выявленные особенности ключевых моментов процедуры подготовки проб и выбора условий хроматографического анализа могут быть использованы при разработке и валидации биоаналитических методик, применяемых в доклинических и клинических исследованиях.
The HPLC-UV method is widely used for quantitative analysis of drug substances found in biological samples obtained in pharmacokinetics studies, bioequivalence studies, or during therapeutic drug monitoring. The main limitation is associated with a significant background effect of biological matrixes, limiting the sensitivity of HPLC-UV methods.
The aim of the study was to evaluate sample preparation and chromatographic conditions in terms of background signal level during HPLC-UV analysis of blood plasma.
Material and methods: three types of blood plasma (rat, rabbit and human), three chromatographic modes, and three detection wavelengths were used to assess the effect of the precipitation agent, centrifuge conditions, and the inclusion of the solid-phase extraction (SPE) step into the sample preparation procedure on the background signal level during HPLC-UV analysis.
Results. It was established that the background signal was practically unaffected by the chromatographic mode, centrifugation intensity, or introduction of the SPE step. The background signal levels for human and rabbit blood plasma tended to be lower than that for rat blood plasma. The factors that had the greatest effect on the background signal level were the choice of the precipitation agent during sample preparation, and the detection wavelength. It was shown that acetonitrile is preferable to methanol, and that the near UV region should be avoided.
Conclusions. The identified key aspects of sample preparation procedures and chromatographic conditions can be used in the development and validation of bioanalytical methods for preclinical and clinical studies.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.